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Artigo de método
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30 de abril de 2023
Fonte: Sarasija, S. e Norman, K. R. Medição das taxas de consumo de oxigênio em Caenorhabditis elegans intactos. J. Vis. Exp. (2019).
Neste vídeo, mostramos um método de produção de uma população sincronizada com o desenvolvimento de C. elegans adultos estéreis. O protocolo de exemplo sincroniza vermes para estudar as taxas de consumo de oxigênio em animais vivos.
Este protocolo é um trecho de Sarasija e Norman, Medição das Taxas de Consumo de Oxigênio em Caenorhabditis elegans Intacto, J. Vis. Exp. (2019).
1. Crescimento e sincronização da população de nematóides
Esses animais atingirão o estágio larval L4 após ~42 h. Neste momento, mova as larvas L4 usando um picareta de platina para placas NGM semeadas OP50 contendo 0,5 mg / mL de 5-fluoro-2'-desoxiuridina (FUdR) para evitar que produzam progênie.
OBSERVAÇÃO Certifique-se de que, dentro de um experimento, todas as cepas sejam sincronizadas por um perí....
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Tabela 1: Receitas para placas NGM, tampão M9 e solução de alvejante.
.......| Tampão M9 (1 L) | |||
| dH2O | 1.000 mL | ||
| NaCl | 5 g | ||
| KH2PO4 | 3 gramas |
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Não há conflitos de interesse declarados.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 100 mm; placas de Petri de 60 mm | Produtos de laboratório Kord-Valmark | 2900; 2901 | |
| 15 mL tubos cônicos | Corning | 430791 | |
| 50 mL tubos cônicos | Corning | 430829 | |
| ágar | Fisher Científico | BP1423-2 | |
| Bacto peptona | Bd; Bacto | 211677 | |
| Bacto triptona | Bd; Bacto | 211705 | |
| Extrato de levedura Bacto | Bd; Bacto | 212705 | |
| Alvejante | genérico | ||
| Cloreto de cálcio di-hidratado (CaCl2·2H2O) | Fisher Científico | C79-500 | |
| Colesterol | Fisher Científico | C314-500 | |
| Água deionizada (dH2O) | |||
| Pipetas Glass Pasteur | Krackeler Científico | 6-72050-900 | |
| Sulfato de magnésio heptahidratado (MgSO4·7H2O) | Fisher Científico | BP213-1 | |
| Fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) | Fisher Científico | BP363-1 | |
| Fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) | Fisher Científico | Pág. 285-500 | |
| Cloreto de sódio | Fisher Científico | BP358-10 | |
| Hidróxido de sódio (NaOH) | Fisher Científico | BP359-500 | |
| Fosfato de sódio dibásico anidro (Na2HPO4) | Fisher Científico | BP332-1 |
