Ensaio de escalada com mosca: um método para testar a locomoção geral em Drosophila melanogaster

Resumo

Fonte: Gevedon, O., et al. Triagem genética direta in vivo para identificar novos genes neuroprotetores em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve um método simples para quantificar a locomoção da mosca e mostra o ensaio de escalada realizado. O ensaio de escalada com mosca é um teste geral da função motora que depende de uma resposta negativa da geotaxe.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify New Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Ensaio de escalada (adaptado de Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Valide o ensaio de escalada. Neste estudo, teste o ensaio de escalada com base na metodologia descrita anteriormente por Ali et al., usando as moscas Elav^C155>UAS-Tau^R406W (exibindo taxas de passagem de escalada mais baixas) e Elav^C155>UAS-GFP (controle) e Elav^C155>UAS-mCherry (controle).
2. Vire as moscas para uma câmara de teste, uma linha de cada vez (não use anestesia com CO₂) e deixe-as se recuperar por 5 minutos. Se o teste for feito em dias diferentes, realize o ensaio na mesma hora do dia. Neste estudo, todos os ensaios de escalada foram realizados no período da tarde para controlar os efeitos circadianos na locomoção.
   NOTA Evite expor as moscas à luz solar direta durante o teste; Isso interferirá em sua capacidade de escalar.
3. Bata à força a câmara (com o lado marcado para baixo) em um mouse pad colocado em uma superfície sólida 3 vezes para que todas as moscas comecem o ensaio na parte inferior. Observe a locomoção da mosca durante um período de 10 s.
4. Registre o número de moscas que atingem ou ultrapassam a linha de 5 cm dentro desse tempo, bem como o número total de moscas testadas. Repita o protocolo, aguardando 1 min entre cada tentativa, para um mínimo de 3 réplicas de tentativa por linha.
   NOTA No presente estudo, cada frasco continha entre 2 e 19 moscas para a triagem inicial (moscas machos) e entre 6 e 21 moscas para a análise de deficiência de mutantes de linhagens femininas cruzadas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
VWR® Drosophila Vial; Estreito	VWR	75813-160
VWR® Fita de rotulagem de laboratório de uso geral	VWR	89097-912
mouse pad padrão
Stereoscope	Motico		Modelo SMZ-168
Drosophila Incubator	VWR	Rolamento 89510-750
R pacote de software