Drosophila melanogaster (mosca-da-fruta)

Devido ao seu grande tamanho e organização relativamente simples, as células enfermeiras de Drosophila são ideais para estudos de imagem de células vivas. Este vídeo descreve um método de microinjeção para entrega de compostos exógenos nas células, e o protocolo apresentado demonstra o procedimento com sondas de oligonucleotídeos fluorescentes chamadas beacons moleculares (MBs) usadas para visualizar transcritos de mRNA endógenos.

O embrião de Drosophila é cercado por membranas externas protetoras. Para obter acesso ao embrião, o córion - a mais externa das membranas - é frequentemente removido. Este vídeo descreve um método comumente usado de descorionação usando hipoclorito de sódio. O protocolo de exemplo demonstra o procedimento ao empregar técnicas estéreis necessárias para a criação de animais axênicos ou gnotobióticos.

A imunocoloração de oócitos em estágio avançado de Drosophila pode ser desafiadora devido às membranas circundantes dos oócitos. Este vídeo descreve um método de alto rendimento para obtenção de oócitos, sua fixação e remoção de membranas para imunocoloração. O protocolo apresentado demonstra essas técnicas com oócitos em estágio avançado usados para visualizar diferentes estágios da meiose.

Este vídeo descreve um método para remover mecanicamente as membranas córion e vitelina de oócitos maduros de Drosophila previamente fixados. O protocolo apresentado mostra uma demonstração detalhada do procedimento produzindo oócitos compatíveis com ensaios de hibridização in situ fluorescentes.

Este vídeo descreve como realizar microinjeções que fornecem reagentes em embriões vivos de Drosophila. Os pesquisadores podem usar esse método para introduzir compostos exógenos como ácidos nucléicos e proteínas durante os estágios iniciais do desenvolvimento embrionário. O protocolo apresentado demonstra como configurar e realizar o procedimento de injeção de qualquer reagente solúvel - aqui, uma proteína fluorescente para experimentos de imagem ao vivo.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Este vídeo mostra um método para testar a hipóxia em larvas de Drosophila, avaliando suas habilidades de escavação e tunelamento. Usando essa técnica, os pesquisadores podem distinguir larvas com privação de oxigênio daquelas com déficits de desenvolvimento. O protocolo de exemplo demonstra a configuração para este ensaio.

Ao corar discos imaginais de Drosophila, muitas vezes é realizada uma dissecção grosseira onde os discos são expostos, mas permanecem presos ao corpo. Uma vez corados, os discos de interesse são isolados e montados. O protocolo de exemplo demonstra um procedimento para dissecção e montagem do disco imaginal da asa.

A junção neuromuscular da Drosophila (NMJ) é usada como modelo para estudar a morfologia e a função das sinapses. Este vídeo descreve características importantes que os pesquisadores quantificam para caracterizar o NMJ. O protocolo de exemplo demonstra um software capaz de realizar a quantificação automaticamente.

Este vídeo descreve a ablação a laser de dois fótons de axônios em uma larva de Drosophila melanogaster e um exemplo de protocolo para induzir lesão e imagem do local da lesão.

Este vídeo descreve como preparar filés larvais usados para visualizar neurônios de arborização dendrítica sensorial (da) e suas células epidérmicas associadas. O protocolo apresentado mostra em detalhes como remover o tecido muscular da parede do corpo, preservando a morfologia das células, o que melhora a imunocoloração e a visualização dos neurônios e células epidérmicas obscurecidas.

A hemolinfa da Drosophila serve como sangue e fluido intersticial, circulando por todo o corpo durante os estágios larva e adulto. Este vídeo descreve um protocolo de coleta de hemolinfa larval para quantificar as células circulantes.

As larvas de Drosophila são sensíveis à luz e respondem às mudanças na luz circundante. Este vídeo descreve um ensaio que testa sua capacidade de evitar a luz, chamado de ensaio do ponto de luz. O protocolo apresentado demonstra como configurar o ensaio com um LED de luz azul e mostra como registrar o comportamento do animal em resposta ao encontro com a luz.

Este vídeo descreve a glândula anelar de Drosophila, uma estrutura endócrina complexa importante para a biossíntese e secreção de ecdisteróides e outros hormônios. O protocolo apresentado demonstra sua dissecção, fixação e imunocoloração.

As larvas de Drosophila têm neurônios sensoriais dedicados – nociceptores – cuja resposta a estímulos térmicos potencialmente prejudiciais desencadeia comportamentos aversivos – ou os chamados "nocifensivos" – no animal. Este vídeo descreve um método para avaliar a nocicepção térmica registrando o comportamento larval em resposta à aplicação local de uma sonda de calor na cutícula. Este método é, portanto, chamado de ensaio de sonda de calor local.

As moscas-das-frutas Drosophila podem distinguir pequenas mudanças de temperatura e, portanto, selecionar ambientes com condições térmicas favoráveis. Este vídeo descreve um ensaio comportamental que testa a preferência de temperatura de larvas de Drosophila em um gradiente térmico linear.

Este vídeo descreve a glândula linfática da Drosophila - o local primário de hematopoiese na larva da mosca - e mostra um exemplo de protocolo para dissecar e montar o órgão para imuno-histoquímica e imagens fluorescentes.

Este artigo descreve uma técnica para remover o pupário de um inseto, mantendo a pupa interna intacta e, portanto, adequada para uma investigação mais aprofundada. O protocolo de exemplo mostra o procedimento com Drosophila guttifera; no entanto, esta técnica é aplicável a outras espécies de Drosophila.

Este vídeo descreve como dissecar e isolar o complexo olho-cérebro das pupas de Drosophila. O protocolo apresentado demonstra o procedimento produzindo tecido de alta qualidade, compatível com, por exemplo, imunocoloração, bem como outros experimentos de expressão gênica.

Os músculos de vôo da Drosophila são usados como um sistema modelo para o desenvolvimento e fisiologia muscular. Este vídeo descreve a musculatura de voo de adultos e destaca um protocolo para dissecar o desenvolvimento de músculos de voo indireto que são adequados para o sequenciamento de RNA de pupas.

Este vídeo descreve um ensaio de condicionamento clássico que testa o aprendizado e a memória em Drosophila, chamado condicionamento de namoro. O ensaio é baseado na redução do namoro masculino após sofrer uma rejeição por uma fêmea pré-acasalada não receptiva. O protocolo de exemplo mostra uma configuração para o procedimento que pode ser usada para avaliar a memória de curto e longo prazo.

Este vídeo descreve um método simples para quantificar a locomoção da mosca e mostra o ensaio de escalada realizado. O ensaio de escalada com mosca é um teste geral da função motora que depende de uma resposta negativa da geotaxe.

Este vídeo descreve a dissecção das glândulas acessórias de moscas machos e mostra um exemplo em que a glândula isolada será dissociada em uma única suspensão celular.

Este vídeo descreve a anatomia geral do ovário de Drosophila e apresenta um método de dissecar ovários para imagens ao vivo ou fixas.

Este artigo descreve a dissecção dos túbulos anteriores de Malpighi (MT) de uma mosca Drosophila fêmea e um protocolo de exemplo de Rossano et al. (2017) em que os MTs são preparados para imagens ao vivo em uma câmara de perfusão.

Este vídeo descreve o ensaio da ilha, um método comportamental usado para estudar a locomoção da Drosophila. O protocolo de amostra apresenta uma configuração para o ensaio compatível com a análise de imagem semiautomatizada.

Os cientistas usam o protocolo de vida útil da Drosophila para medir como diferentes condições experimentais afetam a longevidade das moscas e gerar curvas de sobrevivência no processo para quantificar os resultados experimentais. O protocolo de amostra apresenta o ensaio que está sendo aplicado para estudar os efeitos na longevidade da exposição a concentrações variadas de produtos químicos desreguladores endócrinos, ou EDCs, como 17-α-etinilestradiol (EE2).

Este vídeo descreve um ensaio de alimentação para moscas-das-frutas no qual alimentos coloridos são usados para monitorar a alimentação e o efeito que os compostos adicionados podem ter na atividade alimentar. O protocolo de exemplo testa os efeitos de vários produtos químicos desreguladores endócrinos (EDC).

Este vídeo descreve um método de montagem de cérebros intactos de moscas adultas sob uma lâmina de ponte e mostra o protocolo realizado em cérebros imunomarcados para microscopia fluorescente.

Este vídeo descreve um método de triagem para identificar moscas transgênicas de Drosophila, cujo genoma foi modificado usando CRISPR-Cas9. O CRISPR-Cas9 é uma poderosa ferramenta de edição de genoma que revolucionou a maneira como os cientistas podem manipular o genoma de um organismo. No protocolo de exemplo, veremos como identificar mutantes gerados por CRISPR, em que uma inserção de uma sequência de transativação substitui o primeiro éxon do gene branchless (bnl), criando assim uma linha de...

A microscopia eletrônica de varredura (SEM) é uma ferramenta poderosa para obter imagens - principalmente - das características da superfície de uma amostra biológica. A preparação adequada da amostra, no entanto, é fundamental para a obtenção de imagens de qualidade. Este vídeo se concentra nas etapas de desidratação e secagem da preparação de Drosophila adulta intacta para SEM.

Este vídeo descreve como incorporar cabeças de Drosophila em parafina usando o método do colarinho, uma técnica que prepara cabeças de mosca para seccionamento em série. As seções de parafina são usadas para exames histológicos da anatomia do cérebro e para a avaliação da neurodegeneração. O protocolo apresentado demonstra como várias moscas podem ser processadas em uma preparação, aumentando assim a eficiência do tempo e minimizando os artefatos experimentais.

Este vídeo descreve como realizar uma injeção de moscas adultas vivas e inclui um protocolo de exemplo no qual partículas marcadas e azul de tripano são injetadas no abdômen da mosca para testar a fagocitose.

Este vídeo descreve o ensaio de preferência de sabor, um método comportamental usado para medir a atração ou evitação por soluções coloridas com sabor diferente, avaliando a coloração abdominal da mosca após a ingestão da substância preferida. O protocolo apresentado demonstra o procedimento usado para medir a preferência das moscas por soluções de concentrações variadas de sacarose.

Este vídeo descreve o ensaio CApillary FEeder, ou CAFE, um método comportamental que mede a ingestão de alimentos e a preferência de moscas-das-frutas desenfreadas. O protocolo apresentado mostra como realizar o ensaio com evaporação mínima dos capilares cheios de líquido usados para fornecer o alimento e rastrear sua ingestão.

Este vídeo descreve como dissecar e isolar o cérebro adulto de Drosophila – um procedimento necessário para visualizar o órgão, que é obscurecido pela cutícula, olho e tecido traqueal. O protocolo de exemplo mostra uma demonstração detalhada produzindo preparações de alta qualidade que podem ser usadas para imunocoloração e métodos de imagem em neurobiologia de Drosophila.

A microbiota de Drosophila afeta o desenvolvimento, a imunidade e a fisiologia do animal. Este vídeo descreve um método para quantificar bactérias de moscas, determinando as unidades formadoras de colônias de preparações de corpo inteiro. O protocolo apresentado demonstra a técnica com moscas, criadas em condições gnotobióticas usando quatro espécies bacterianas.

Este vídeo descreve um método para dissecar, fixar e montar a perna adulta da Drosophila, preservando sua neuromusculatura intacta para análise de imagem.

Este vídeo descreve como rastrear moscas que andam livremente para avaliar sua capacidade geral de locomoção. O protocolo apresentado demonstra a configuração do ensaio e a análise de dados usando software de rastreamento de vídeo.

Este vídeo descreve um método para construir um aspirador de moscas, que pode ser usado para transferir insetos entre recintos sem anestesia. O aspirador no protocolo de exemplo foi preparado para um experimento para quantificar comportamentos individuais de...

Este vídeo descreve imagens de cálcio in vivo em neurônios de Drosophila usando GCaMP. O clipe de protocolo em destaque mostra como registrar alterações na fluorescência do GCaMP dos neurônios do corpo do cogumelo durante um experimento de condicionamento olfativo.

As moscas-das-frutas têm um sistema olfativo complexo, podem discriminar centenas de odores e usar seu olfato para direcionar decisões comportamentais. Este vídeo descreve o ensaio do olfatômetro de quatro vias, um método para estudar as respostas comportamentais olfativas em moscas. O clipe de protocolo apresentado mostra como lidar com moscas de teste e quais são as etapas críticas durante a execução do ensaio.

A agressão é um comportamento inato e a experiência anterior de luta afeta a estratégia de luta e o resultado de competições posteriores em moscas. Este vídeo descreve um ensaio usado para estudar o comportamento agressivo da Drosophila. O protocolo de exemplo apresenta o ensaio realizado em uma configuração que elimina o manuseio de moscas e, portanto, reduz o estresse para os animais, o que de outra forma afetaria o desempenho dos sujeitos.

Este vídeo descreve um método para testar o comportamento exploratório olfativo na mosca da fruta, chamado de labirinto em Y. O clipe de protocolo apresentado demonstra como configurar e conduzir o ensaio.

Este vídeo descreve o sistema de monitoramento de atividade (DAM) da Drosophila usado para rastrear a atividade locomotora. Os pesquisadores usam dados de atividade coletados do DAM para estudar os ritmos circadianos em moscas-das-frutas. O clipe de protocolo em destaque mostra como carregar moscas no dispositivo e registrar dados de atividade para experimentos circadianos.

A optogenética permite o uso da luz para manipular neurônios que são geneticamente modificados para expressar opsinas específicas – proteínas sensíveis à luz cuja ativação da luz desencadeia uma mudança no estado do neurônio. Aqui descrevemos uma abordagem optogenética em Drosophila usando a opsina Channelrhodopsin2. O protocolo de exemplo apresenta um conjunto de ensaios optogenéticos para estudar os circuitos neuronais por trás do comportamento de fuga da mosca.

Neste vídeo, destacamos uma dissecção do intestino adulto de Drosophila e uma coleção de intestinos médios adequados para dissociação de célula única e FACS para isolar células-tronco intestinais.

Este vídeo descreve o coração adulto da mosca, ou também chamado de vaso dorsal da Drosophila. O protocolo apresentado demonstra um procedimento de dissecção para preparações de coração vivo.

As fêmeas de Drosophila escolhem entre substratos e selecionam locais atraentes para a postura de ovos. Este vídeo descreve um ensaio comportamental que testa sua tomada de decisão, chamado de ensaio de preferência de postura de ovos. O clipe em destaque demonstra o procedimento com uma configuração personalizada, que permite aos pesquisadores não apenas testar o comportamento de muitas fêmeas ao mesmo tempo, mas também é compatível com gravação de vídeo e configurações optogenéticas.