Incorporação de cabeças de Drosophila adultas em parafina: preparando tecido para histologia

Resumo

Fonte: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Histologia de massa para quantificar a neurodegeneração em Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve como incorporar cabeças de Drosophila em parafina usando o método do colarinho, uma técnica que prepara cabeças de mosca para seccionamento em série. As seções de parafina são usadas para exames histológicos da anatomia do cérebro e para a avaliação da neurodegeneração. O protocolo apresentado demonstra como várias moscas podem ser processadas em uma preparação, aumentando assim a eficiência do tempo e minimizando os artefatos experimentais.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Sunderhaus e Kretzschmar, Histologia de massa para quantificar a neurodegeneração em Drosophila, J. Vis. Exp. (2016).

1. Fixação da cabeça em colares e incorporação em parafina

NOTA: Todas as etapas do processo de fixação devem ser realizadas em uma hotte. O metilbenzoato, embora não represente um risco para a saúde, tem um odor altamente distinto, que pode ser avassalador se não for manuseado em uma capela de exaustão.

1. Antes de anestesiar as moscas, faça 50 mL de solução de Carnoy adici....

Resultados

Figura 1: Seções seriadas de parafina. A) Usando o método do colarinho, as moscas experimentais e de controle podem ser processadas como uma amostra, enfiando-as em um colarinho. Moscas senoidais oculares sem olhos são inseridas para orientação (setas). B) Esquema mostrando a orientação das cabeças das moscas no colarinho. C) Nesta imagem, seções de diferentes c.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
colarinho	Genesee Científico	TS 48-100	Estamos usando colares personalizados que são feitos de uma peça de metal em vez de camadas como as da Genesee.
Bandeja de cubos de gelo de borracha para embutir	Loja doméstica		O tamanho pode ser feito sob medida, colando em paredes adicionais
Prato de cristalização	Companhia Científica Fisher	08-762-3
éter	Companhia Científica Fisher	E138-1
etanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroforme	Companhia Científica Fisher	C298-500
Ácido Acético Glacial	Companhia Científica Fisher	A38-212
Metilbenzoato	Companhia Científica Fisher	M205-500	Odor distinto - Use em capela de exaustão!
Cera de parafina de baixo ponto de fusão	Companhia Científica Fisher	T565	Certifique-se de manter o extra derretido em banho-maria a 65 °C