Preparação de filé larval: um método para visualizar neurônios sensoriais intactos e células epidérmicas associadas

Neste artigo

Resumo

Fonte: Tenenbaum, C. M., Gavis, E. R. Remoção de tecido muscular de Drosophila de filetes larvais para análise de imunofluorescência de neurônios sensoriais e células epidérmicas. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve como preparar filés larvais usados para visualizar neurônios de arborização dendrítica sensorial (da) e suas células epidérmicas associadas. O protocolo apresentado mostra em detalhes como remover o tecido muscular da parede do corpo, preservando a morfologia das células, o que melhora a imunocoloração e a visualização dos neurônios e células epidérmicas obscurecidas.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Tenenbaum e Gavis, Remoção de Tecido Muscular de Drosophila de Filetes Larvais para Análise de Imunofluorescência de Neurônios Sensoriais e Células Epidérmicas, J. Vis. Exp.(2016).

NOTA: O procedimento de remoção muscular (Figura 1) é uma modificação dos métodos descritos anteriormente para a preparação de filetes larvais. As etapas que precedem e seguem a remoção muscular são descritas brevemente e o leitor é encaminhado para trabalhos anteriores em Brent, et al., J. Vis. Exp. (2009) e Karim e Moore, J. Vis. Exp. (2....

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Resultados

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Figura 1: Visão geral do procedimento de remoção muscular. Uma larva é dissecada e fixada em uma placa de dissecação de elastômero de silicone. Para remover o tecido muscular, uma ponta de fórceps é inserida entre o músculo e a camada de células epidérmicas, começando na linha média dorsal perto de um limite de segmento (2.2). A pinça é puxada para cima para quebrar a fixação entre o músculo e a parede do corpo (2.3). Is.......