C. elegans Extrusão de gônadas: uma técnica de dissecção rápida

Resumo

Fonte: Gervaise, A. L. e Arur, S. Análise Espacial e Temporal de ERK Ativo na Linha Germinativa de C. elegans. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve um método para dissecar gônadas de hermafroditas adultos de C. elegans, resultando em tecidos adequados para imunocoloração e imagens fluorescentes.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Gervaise e Arur, Análise Espacial e Temporal de ERK Ativo na Linha Germinativa de C. elegans. J. Vis.(2016).

1. Dissecção de vermes adultos para obtenção de gônadas

1. Escolha 100 - 150 WT (N2) ou genótipo desejado de vermes no estágio de desenvolvimento desejado e específico (L1, L2, L3, L4, adulto, etc.) em 100 μL de tampão M9 em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL.
2. Encha o tubo da microcentrífuga com 900 μL de tampão M9 (consulte ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Prato de relógio de vidro de fundo plano	Agar Científico	AGL4161	Usamos vidro porque as gônadas dissecadas geralmente grudam no plástico
Agulhas de 25 g	BD PrecisionGlide	305122
Seringas (podem ser 1 ou 5 mL)	Seringas BD	1 mL: BD 309659
Lâminas de microscópio (25 x 75 x 1,0 mm)	Marca de pescador	12-550-343
Centrífuga de bancada clínica
*Solução M9
Levamisol	sigma	L9756
*Receita de buffer M9			3 g de KH2PO4, 6 g de Na2HPO4, 5 g de NaCl, 1 mL 1 M MgSO4, H2O a 1 L.