Ensaio de gradiente de temperatura: um método para testar a preferência de temperatura em larvas de Drosophila

Resumo

Fonte: Liu, J., et al. Um ensaio de gradiente de temperatura para determinar as preferências térmicas de larvas de Drosophila. J. Vis. Exp. (2018).

As moscas-das-frutas Drosophila podem distinguir pequenas mudanças de temperatura e, portanto, selecionar ambientes com condições térmicas favoráveis. Este vídeo descreve um ensaio comportamental que testa a preferência de temperatura de larvas de Drosophila em um gradiente térmico linear.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Liu et al. Um ensaio de gradiente de temperatura para determinar as preferências térmicas de larvas de Drosophila, J. Vis. Exp. (2018).

1. Configuração do gradiente de temperatura

1. Preparar gradiente unidirecional
   1. Para criar um ambiente úmido durante os ensaios, coloque os dois blocos de alumínio conectados a dois banhos-maria em toalhas de papel molhadas, separados por 10 cm (Figura 1A).
   2. Ligue os dois banhos-maria ~2 h antes de iniciar o ensaio para dar tempo suficiente para que a temperatura dos blocos ....

Resultados

Figura 1: Configurações de ensaio de gradiente único e bidirecional. (A) Configuração de gradiente unidirecional com duas placas de ensaio de alumínio em dois blocos de alumínio. As temperaturas dos blocos de alumínio são controladas pela circulação de água de dois banhos-maria. (B) O arranjo dos três blocos de alumínio, banhos-maria e uma placa de alumínio (250 x 220 mm) para um gradien.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Aparelho de ensaio de gradiente
PolyScience 9106, Banho de Circulação Refrigerado/Aquecido de 6L	Thomas Científico	Pedido 9106	Este modelo está descontinuado. Os modelos de substituição atualizados incluem: 1186R00 e 1197U04 para 120 V, 60 Hz ou 1184L08 e 1197U04 para 240 V, 50 Hz.
Placa de ensaio de alumínio (para gradiente direcional único)			Tamanho externo: 14 x 10,1 x 0,9 cm, tamanho interno: 12,9 x 8,7 x 0,8 cm, anodizado preto.
Placa de alumínio (para gradiente bidirecional)			25 x 22 x 0,2 cm, anodizado preto.
Bloco de alumínio			Tamanho externo: 25,5 x 5 x 1,4 cm, os parâmetros dos canais internos são mostrados na Figura 1D.
Conector para blocos e tubos de alumínio	McMaster-Carr	Rolamento 91355K82
Tubulação de silicone sanitária Tygon	Tygon	Rolamento 57296	1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" parede
nome	companhia	Número de catálogo	Comentários
Artigos e reagentes para doseamento
pilão	EUA Científico	Rolamento 17361	Pilão para tubos de microcentrífuga de 1,5 mL
termômetro	acaso feliz	51II
termopar	acaso feliz	Tipo K
Tampa universal de microplacas	Corning	6980A77
Prato de 35 mm	Corning	9380D40
Fita de rotulagem (para gradiente bidirecional)	Fisher Científico	15-951	Fita de rotulagem Fisherbrand 2 pol x 14 jardas
agarose	Invitrogen	16500500	Prepare a solução a 1%
sacarose	sigma	S0389-5KG	Prepare a solução a 18% antes de iniciar o ensaio
Pincel	Fisher Científico	11860
Tubos de centrífuga de 50 mL	Denville	C1062-P
Escópula	Fisher Científico	14-357Q
Frasco redondo de boca larga de 500 mL	Pyrex	1395-500
Filtro de células (poro de 300 mm)	PluriSelect	Rolamento 43-50300	Item opcional para lavagem de larvas
Caixa de papelão (bandeja de frascos)	Genesee Científico	FS32-124