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Lee e Kang, Medindo o efeito de produtos químicos no crescimento e reprodução de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1. Ensaio de postura de ovos de C. elegans
- Incubar os ovos sincronizados com a idade na placa NGM contendo DMSO ou etoposídeo por 64 h (antes do primeiro nascimento) até o estágio adulto jovem a 20 ° C.
OBSERVAÇÃO: É opcional usar os vermes dos experimentos de medição de crescimento. É conveniente fazer a medição do crescimento e o ensaio de postura de ovos juntos.
- Transfira 5 vermes adultos para as novas placas NGM sem produtos químicos (condição 1, tratamento químico dentro de um determinado período de tempo, dos ovos ao estágio adulto jovem) ou nova placa NGM contendo o mesmo pré-tratamento químico (condição 2, exposição contínua de produtos químicos durante o período experimental geral) e, em seguida, incube-os por 24 h.
OBSERVAÇÃO: Recomenda-se fazer réplicas usando placas de 3-5 NGM para cada tratamento; Essas réplicas podem ser usadas para análise estatística.
- Transfira para a nova placa NGM conforme descrito acima e conte o número de ovos todos os dias. Conte os vermes que rastejaram, morreram e eclodiram internamente.
- Repita essas etapas até que os vermes não ponham mais ovos, geralmente em 5 dias.
- Calcule o número de ovos postos por verme de cada prato e some esses valores todos os dias durante 5 dias para determinar o número total de ovos postos.
OBSERVAÇÃO: Exclua do cálculo o número de vermes que rastejaram e eclodiram internamente.