Ensaio de postura de ovos: um método para quantificar o comportamento de postura de C. elegans

Resumo

Fonte: Lee, S. Y. e Kang, K. Medindo o efeito de produtos químicos no crescimento e reprodução de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. elegans O comportamento de postura de ovos pode fornecer informações importantes em estudos de desenvolvimento, reprodutivos e anatômicos. Este vídeo apresenta as etapas importantes de um ensaio de postura de ovos e mostra um experimento de amostra no qual um medicamento é testado quanto à toxicidade reprodutiva.

Protocolo

Lee e Kang, Medindo o efeito de produtos químicos no crescimento e reprodução de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1. Ensaio de postura de ovos de C. elegans

1. Incubar os ovos sincronizados com a idade na placa NGM contendo DMSO ou etoposídeo por 64 h (antes do primeiro nascimento) até o estágio adulto jovem a 20 ° C.
   OBSERVAÇÃO: É opcional usar os vermes dos experimentos de medição de crescimento. É conveniente fazer a medição do crescimento e o ensaio de postura de ovos juntos.
2. Transfira 5 vermes adultos para as novas placas NGM sem produtos químicos (condição 1, tratamento químico dentro de um determinado período de tempo, dos ovos ao estágio adulto jovem) ou nova placa NGM contendo o mesmo pré-tratamento químico (condição 2, exposição contínua de produtos químicos durante o período experimental geral) e, em seguida, incube-os por 24 h.
   OBSERVAÇÃO: Recomenda-se fazer réplicas usando placas de 3-5 NGM para cada tratamento; Essas réplicas podem ser usadas para análise estatística.
3. Transfira para a nova placa NGM conforme descrito acima e conte o número de ovos todos os dias. Conte os vermes que rastejaram, morreram e eclodiram internamente.
4. Repita essas etapas até que os vermes não ponham mais ovos, geralmente em 5 dias.
5. Calcule o número de ovos postos por verme de cada prato e some esses valores todos os dias durante 5 dias para determinar o número total de ovos postos.
   OBSERVAÇÃO: Exclua do cálculo o número de vermes que rastejaram e eclodiram internamente.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Caenorhabditis elegans N2	Centro de Genética Caenorhabditis (CGC)		Tipo selvagem
Dimethylsulfoxide	Sigma, EUA	D2650
Escherichia coli OP50	Centro de Genética Caenorhabditis (CGC)
Etoposide	Sigma, EUA	E1383
35 × placa de Petri de 10 mm	SPL Life Sciences, Coreia do Sul	Rolamento 10035
Microscópio estéreo	Nikon, Japão	SMZ800N