C. elegans Dissecção de blastômeros: um método para remover a casca do ovo e dissociar células embrionárias

Abstract

Fonte: Hsu, C. R., et al. Reconstituição in vitro de padrões de contato celular espacial com blastômeros embrionários isolados de Caenorhabditis elegans e grânulos de poliestireno adesivos.J. Vis. Exp.(2019).

Este vídeo apresenta um método de isolamento de blastômeros de C. elegans de embriões iniciais. As células resultantes são adequadas para cultura de células ou experimentos ex vivo.

Protocol

Este protocolo é um trecho de Hsu et al, Reconstituição in vitro de padrões de contato celular espacial com blastômeros embrionários isolados de Caenorhabditis elegans e grânulos de poliestireno adesivos, J. Vis. Exp.(2019).

1. Isolamento de blastômero embrionário
2. Use luvas e jaleco para evitar cortes e contato com a solução de branqueamento.
   1. Segure cada extremidade de um microcapilar (capacidade; 10 μL) com a mão direita e esquerda.
   2. Puxe o microcapi....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Conjunto de Tubo Aspirador	Drummond	21-180-13	Para o isolamento do blastômero.
Cepa de Caenorhabditis elegans: N2, tipo selvagem	Centro de Genética Caenorhabditis	N2	Cepa usada neste estudo
Cepa de Caenorhabditis elegans: KSG5, genótipo: zuIs45; itIs37	em casa	KSG5	Cepa usada neste estudo
Mircopipets calibrados, 10 μL	Drummond	21-180-13	Para o isolamento do blastômero
CD Concentrado lipídico	Tecnologias da Vida	11905031	Para o isolamento do blastômero. Trabalhe na coifa de cultura de tecidos.
Clorox	Clorox	N. A.	Para o isolamento do blastômero. Abra um novo frasco quando o tratamento com hipoclorito não funcionar bem.
Porta-lamínula	Em casa	N.A.	Para o isolamento do blastômero.
Microscópio de dissecação: Zeiss Stemi 508 com suporte M. A fonte de luz é LED embutido. A ampliação da ocular é de 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Para o isolamento do blastômero.
Soro Bovino Fetal, Qualificado One Shot, origem do Canadá	Gibco	A3160701	Para o isolamento do blastômero. Trabalhe na coifa de cultura de tecidos.
Agulhas hipodérmicas de uso geral e deslizamento de precisão, calibre 25	Bd	14-826AA	Para o isolamento do blastômero
inulina	Alfa Aesar	AAA1842509	Para o isolamento do blastômero
MEM Solução de Vitamina (100x)	Gibco	11120052	Para o isolamento do blastômero.
Multitest Slide 10 Poços	MP Biomédicos	ICN6041805	Para o isolamento do blastômero
Penicilina-estreptomicina (10.000 U/mL)	Gibco	15140148	Para o isolamento do blastômero.
Polivinilpirrolidona	BioReagentes Fisher	BP431-100	Para o isolamento do blastômero
Cloreto de potássio	Bioshop	POC888	Para o isolamento do blastômero
Meio estéril de Drosophila de Schneider	Gibco	21720024	Para o isolamento do blastômero. Trabalhe na coifa de cultura de tecidos.
Cloreto de sódio	Bioshop	SOD001	Para o isolamento do blastômero
Solução de hidróxido de sódio, 10 N	Fisher Química	SS255-1	Para o isolamento do blastômero
Filtros de seringa, PTFE, não estéreis	Basix	13100115	Para o isolamento do blastômero.
Tubulação de laboratório Tygon S3, formulação E-3603, diâmetro interno 3,175 mm	Plásticos de desempenho da Saint Gobain	89403-862	Para o isolamento do blastômero.
Tubulação de laboratório Tygon S3, formulação E-3603, diâmetro interno 6,35 mm	Plásticos de desempenho da Saint Gobain	89403-854	Para o isolamento do blastômero.