Irradiação UV: Um Método para Integrar Arranjos Extracromossômicos

Resumo

Fonte: Mariol, M. C et al. Um Protocolo Rápido para Integração de Matrizes Extracromossômicas com Alta Taxa de Transmissão no Genoma de C. elegans.J. Vis. Exp.(2013).

A microinjeção de transgenes geralmente resulta em cepas de C. elegans com grandes matrizes extracromossômicas, que resultam em expressão e transmissão variáveis do transgene. A irradiação UV pode induzir a integração cromossômica da matriz e uma transmissão transgênica mais estável.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Mariol et al, Um Protocolo Rápido para Integração de Matrizes Extracromossômicas com Alta Taxa de Transmissão no Genoma de C. elegans, J. Vis. Exp.(2013).

1. Irradiação UV e Recuperação de Vermes Transgênicos

1. Irradiação de vermes:
   1. Escolha 30-100 animais transgênicos fluorescentes L4 em placas de cultura separadas (15-20 animais por placa).
   2. Coloque as placas, com as tampas removidas, em um reticula....

Resultados

Tabela 1. Comparação dos protocolos padrão e aprimorados para integração de matrizes extracromossômicas no genoma de C. elegans.Dois transgenes não integrados transmitindo aproximadamente na mesma frequência foram integrados usando o protocolo padrão ou aprimorado. A principal diferença reside no fato de que no protocolo padrão é realizada uma triagem da progêni.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
U.V. reticulador	Fischer Scientific		Comprimento de onda 254 nm
Microscópio SteREO Discovery V8	Carl Zeiss, Inc.
placas de Petri, 60 mm	Cml	BPS55E6
Fio de platina 0,25 mm	Alfa Aesar	04/06/7440	Para fazer uma picareta para minhocas