Entrega intrabrônquica: uma técnica para administrar um agente experimental seletivamente em um pulmão de camundongo

Resumo

Fonte: Liao, S. et. al. Administração intrabrônquica direta para melhorar a deposição de agente seletivo no pulmão do camundongo. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve uma abordagem intrabrônquica para administrar um agente experimental seletivamente nos pulmões distal direito e esquerdo. No protocolo apresentado, administraremos bleomicina intrabrônquica em um camundongo para obter um melhor modelo de fibrose pulmonar.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Intubação não cirúrgica de IB e abordagens de parto

1. Abordagem IB para canulação lobar seletiva do pulmão direito distal
   1. Depois de realizar a canulação intratraqueal (IT) (use a mão dominante para intubar o cateter estendido na traqueia através da cavidade oral), gire a placa plástica +30° (Figura 1A).
   2. Segure o cubo do cateter e guie-o naturalmente em paralelo à linha média do camundongo, estendendo-o até profundidades baseadas no peso, conforme descrito na Tabela 1.
      nota: A resistência nessas profundidades deve ser observada. Neste ponto, o mouse ficará ligeiramente taquipneico, conforme explicado nos resultados representativos. Para um operador experiente, aproximadamente 90% das tentativas canulam com sucesso o pulmão direito (com taquipneia observada).
   3. Forneça 20 μL de corante azul de Evans a 0,3% (EBD, consulte a Tabela de Materiais) com uma ponta de carregamento de gel.
   4. Dispense 1–2 alíquotas (0,1 mL cada) de ar usando o conta-gotas de vidro.
      nota: Isso garante a eliminação da solução residual de EBD (ou agentes experimentais) de dentro do cateter.
   5. Retire o cateter e mantenha a posição do mouse por 30 s.
   6. Coloque o animal em um cobertor quente até que ele recupere a consciência. A recuperação geralmente é concluída em 2 minutos.
2. Abordagem do IB para canulação segmentar seletiva do pulmão esquerdo distal
   1. Após realizar a canulação IT (use a mão dominante para intubar o cateter estendido na traqueia através da cavidade oral), gire a placa plástica -74° (Figura 1B).
   2. Segure o cubo do cateter e aplique uma leve pressão para avançar o cateter no brônquio principal esquerdo, enquanto coloca uma pressão modesta para baixo (90°) e em direção ao suporte para livros. Nas profundidades indicadas na Tabela 1, o operador deve observar a resistência à medida que os segmentos inferiores do pulmão esquerdo são engatados. Se ocorrer taquipneia, retire o cateter para a posição de 20 a 25 mm e tente novamente.
   3. Após a canulação dos segmentos pulmonares inferiores esquerdos, é necessária uma mudança de posição para permitir a assistência gravitacional para a administração do agente. Gire a placa plástica -30° (Figura 1B).
   4. Forneça 40 μL de EBD a 0,3% com uma ponta de carregamento de gel.
      nota: É viável administrar um volume maior de agente porque o pulmão esquerdo tem apenas um lobo.
   5. Dispense 1–2 alíquotas (0,1–0,3 mL cada) de ar usando os conta-gotas de vidro.
      nota: Isso garante a eliminação de qualquer EBD residual (ou agentes experimentais) de dentro do cateter.
   6. Retire o cateter e mantenha a posição do mouse por 30 s.
   7. Coloque o animal em um cobertor quente até que ele recupere a consciência. A recuperação geralmente é concluída em 2 minutos.

Resultados

Figura 1: Abordagem para canulação e administração lobar seletiva do pulmão direito/esquerdo.(A) Para atingir o pulmão direito, a placa plástica é girada +30°, melhorando a facilidade de engatar seletivamente o brônquio principal direito. O cateter é avançado (de acordo com as distâncias propostas na Tabela 1) para engatar sel...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cateter IV blindado 22 G	Bd	381423
Corante azul Evans	Sigma-Aldrich	E2129
LED-30W Fibra Óptica Dual Gooseneck Luzes Microscópio Iluminador	AmScope	LED-30W
Agulha Precisionglide, 18G x 1"	Bd	305195	Ponta chanfrada, 12 mm de comprimento