Ensaio de imunofluorescência: um método para identificar células tumorais capturadas em um fio médico

Resumo

Fonte: Gallerani, G. et.al., Caracterização de células tumorais usando um fio médico para capturar células tumorais circulantes: uma abordagem 3D baseada em imunofluorescência e DNA FISH. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve a técnica de coloração por imunofluorescência de células tumorais circulantes capturadas em um fio médico funcionalizado. O fio funcionalizado permite o isolamento das CTCs in vivo, diretamente da corrente sanguínea do paciente.

Protocolo

1. Imuno-DNA FISH em fio

1. Spike-in de linha celular no fio (suporte 3D)
   nota: A configuração preliminar envolve uma seleção precisa de linhagens de células aderentes com base na positividade de EpCAM. O fio é funcionalizado com anticorpos anti-EpCAM para que apenas as células positivas para EpCAM sejam coradas.
   nota: Não toque na parte funcionalizada do fio para evitar qualquer dano.
   nota: Todas as etapas devem ser realizadas sob uma capela de fluxo laminar em condições estéreis.
   1. Ressuspenda todo o conteúdo de um frasco T75 (80% de confluência) em um frasco ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
etanol	Carlo Erba	# 414605
Pré-adolescente 20	BIO RAD	# 1706531
PBS (solução salina tamponada com fosfato)	Medicago	# 09-9400-100
acetona	Sigma Aldrich	# 534064-500ML
EM BORRACHAEM CIMENTO	Talens Reais	# 95306500
EpCAM-FITC (clone: HEA-125)	Mitenyi	#130-080-301
RPMI 1640	Gibco	# 31870-025
XT ALK BA	Sondas MetaSystems	# D-6001-100-OG
Detektor CANCER01 EpCAM	Gilupi Nanomedizin		Fio funcionalizado
Microscópio Fluorescente ZEISS Axioskop	Zeiss
Nikon NIS-Elements BR 4.11.00 64 bits software	Nikon
Câmera digital Nikon DS-QiMc de 12 bits	Nikon	DS-QiMc