Isolamento de exossomos: uma técnica para separar exossomos do plasma de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas

Resumo

Fonte: Giallombardo, M., et al. Análise de miRNA exossômico no plasma de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) por meio de qPCR: uma ferramenta de biópsia líquida viável. J. Vis. Exp.(2016).

Os exossomos isolados no plasma podem ser usados como uma forma não invasiva e repetível para a detecção e acompanhamento dos biomarcadores para detecção precoce e progressão da doença. Este vídeo descreve o protocolo para a separação de exossomos das amostras de plasma de pacientes com câncer de pulmão de células não pequenas, que pode ser usado para extrações de DNA e proteínas.

Protocolo

1. Isolamento de exossomos

Nota: O isolamento dos exossomos das amostras de plasma, foi realizado com um kit comercial, de acordo com o protocolo do fabricante e adicionando tratamento com RNAse: (todas essas etapas devem ser realizadas com equipamentos de proteção individual e ambiental e seguindo procedimento legal específico para manipulação de amostras biológicas).

1. Retirar 1 ml de plasma de cada amostra, conservada a -80 °C, e colocá-la sobre gelo.
2. Centrifugar a amostra a 2.000 × g durante 20 min à RT; esta passagem é obrigatória para remover as células e os detritos.
3. Transferir o sobrena....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Kit de isolamento total de exossomos (de plasma)	Invitrogen	4484450	Use o tratamento com proteinase K
Ribonuclease A	Sigma-Aldrich	R4875-100MG
Mini kit RNAspin Illustra 50	GE HealthCare	25-0500-71