Coloração de May-Grunwald Giemsa: um método para corar células da medula óssea

Resumo

Fonte: Mopin, A. et al. Um protocolo detalhado para caracterizar a linha celular murina C1498 e seu modelo de camundongo com leucemia associada. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo descreve a técnica de coloração de células da medula óssea usando a coloração de May-Grünwald Giemsa. No protocolo, coraremos as células de leucemia mieloide murina, células C149, para analisar a morfologia e contagem diferencial.

Protocolo

1. Caracterização in vitro da linha celular C1498

1. Cultura in vitro de células C1498
   1. Prepare o meio RPMI completo (Roswell Park Memorial Institute) 1640 adicionando 50 ml de soro fetal bovino (FBS), 5 ml de penicilina (100 U / ml) -estreptomicina (100 μg / ml), 500 μl de 50 mM de β-mercaptoetanol, 5 ml de ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-etano sulfônico (HEPES), 5 ml de aminoácidos não essenciais e 5 mL de piruvato de sódio a 500 ml de meio RPMI.
   2. Cultive a linha celular C1498 em RPMI completo. Colher as células em suspensão por pipetagem e transferi-las para um tubo de 50 ml. Centrifugue a 350 x g durante 10 min e....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Linha celular C1498	ATCC	TIB 49
2-Mercaptoetanol, Gibco	ThermoFisher Scientific	21985
Soro fetal bovino (FBS)	ThermoFisher Scientific	Rolamento 10270
HEPES, Gibco (1 m)	ThermoFisher Scientific	15630
Penicilina-estreptomicina, Gibco	ThermoFisher Scientific	Rolamento 15140
RPMI 1640 Médio (Gibco, Suplemento GlutaMAX)	ThermoFisher Scientific	Nº 61870
Solução de azul de tripano (0,4 %)	ThermoFisher Scientific	Rolamento 15250-061	concentração 1/2
Câmara e cartão de filtro (EZ Cytofunnel Shandon)	Thermo Científico	A78710003
Solução de May-Grünwald	Diagnóstico RAL	Rolamento 320070
Solução Giemsa R	Diagnóstico RAL	Rolamento 320310	concentração 1/20
Solução tampão de pH 6,8	Diagnóstico RAL	330368
Slides (Starfrost - bordas retificadas 90)	Vidro Knittel	VS1137# 077FKB
Óculos de cobertura para microscópio, 24 x 24 mm	Vidro Knittel	VD1 2424 Y100
Citocentrífuga Shandon Cytospin 3	ThermoFisher Scientific