Classificação de células ativadas por magnetismo: um método para isolar células positivas do c-kit

Resumo

Fonte: Kesarwani, M., et al. Métodos para avaliar o papel de c-Fos e Dusp1 na dependência de oncogenes. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo descreve a técnica de isolamento de células positivas do c-kit da medula óssea de um camundongo. No protocolo, isolaremos células positivas para c-kit de um camundongo transgênico para validar c-Fos e Dusp1 sozinhos ou juntos como alvos de drogas na leucemia.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

Isolamento de células c-Kit⁺ da medula óssea

1. Sacrifique os ratos de acordo com as diretrizes institucionais.
   NOTA: Aqui, os camundongos foram expostos ao dióxido de carbono (CO₂) de acordo com a taxa de fluxo recomendada pela AVMA até que a morte fosse determinada pela cessação da respiração e dos batimentos cardíacos, seguida de luxação cervical.
2. Colha os ossos da perna do camundongo - dois fêmures, ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Materiais Biológicos
IMDM	Cellgro (corning)	15-016-CVR
SCF murino recombinante	Especificações	CYT-275
Ligante murino recombinante Flt3-Ligante	Especificações	CYT-340
IL-6 murina recombinante	Especificações	CYT-350
IL-7 murina recombinante	Peprotech	217-17
FBS	Atlanta biológico	S11150
Pbs	Corning	21040CV
Estrela de células de nylon de 70 μm	Becton Dickinson	Rolamento 352350
Colunas LS	Miltenyi	130-042-401
Edta	Ambion	AM9261
Bsa	sigma	Rolamento A7906
Pilão de argamassa	Coor tek	60316 e 60317
Kit CD117 MicroBead	Miltenyi	130-091-224
Suporte magnético	Miltenyi