Isolamento de células T-ALL marcadas com fluorescência: um método para isolar células T-ALL de peixe-zebra adulto

Resumo

Fonte: Pruitt, M. M., et al. Isolamento da População Lateral na Leucemia Linfoblástica Aguda de Células T Induzida por Myc em Peixe-Zebra. J. Vis. Exp. (2017).

Este protocolo descreve a técnica de isolamento de células T marcadas com fluorescência

Protocolo

1. Coleta de células T-ALL marcadas com fluorescência do peixe tumor primário

1. Prepare pelo menos 20 mL de soro fetal bovino inativado por calor a 10% em solução salina tamponada com fosfato 0,9x (FBS / PBS).
2. Adicione 1 mL de FBS / PBS a um frasco para injetáveis de sal de heparina sódica (300 unidades).
3. Selecione peixes com tumores em mais de 50% do corpo, ou aqueles peixes com dificuldade para comer ou nadar. Sacrifique os peixes com uma overdose de tricaína ou por imersão em água gelada. Confirme a morte por falta de movimento branquial e batimentos cardíacos.
4. Use uma lâmina de barbear para remover a cabeça ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Peixe-zebra singênico (CG2)			Ver Mizgireuv et al., 2006
RAG2:plasmídeo C-MYC			Laboratório Langenau
rag2: plasmídeo GFP construído no Laboratório de Jong			promotor rag2 do Laboratório Langenau
plasmídeo pCS2-transposase			Laboratório Chien
Microscópio SteREO Discovery V8	Microscopia Carl Zeiss	Rolamento 495015-0008-000
Metanossulfonato de tricaína (MS-222)	Química Ocidental, Inc	Fisher Scientific - NC0342409	100 gramas
Soro fetal bovino (FBS)	Laboratórios HyClone, Inc.	Fisher Scientific - SH3007103	500 mL
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Gibco da Life Technologies	1001-023	pH 7,4 (1x) - 500 mL
Sal de heparina sódica	Sigma-Aldrich	2106	Frascos de 15 a 300 unidades
Filtro de malha de 40 μm	Marca Falcon Corning	Rolamento 352340	Caixa de 50
Azul de tripano	Sigma Ciências da Vida	T8154	20 mL - Solução (0,4%)