Ensaio de População Lateral: Um Método para Isolar a População Lateral de Células Tumorais de Peixe-Zebra

Resumo

Fonte: Pruitt, M. M., et al. Isolamento da População Lateral na Leucemia Linfoblástica Aguda de Células T Induzida por Myc em Peixe-Zebra. J. Vis. Exp. (2017).

O protocolo a seguir descreve um método para isolar a população lateral de células T de células T A população secundária carece de marcadores celulares proeminentes e, portanto, usamos o ensaio de efluxo de corante Hoechst 33342 para isolá-los.

Protocolo

1. Coloração das células T-ALL marcadas com fluorescência com Hoechst 33342 para identificar a população lateral

1. Diluir Hoechst 33342 1:10 com H₂O livre de nuclease para fazer a concentração de trabalho de 1 mg/ml. Armazene o corante a 4 °C e no escuro.
2. Prepare uma solução 100 mM de verapamil dissolvendo 49,1 mg em 1 mL de dimetilsulfóxido (DMSO).
   nota: O verapamil é um inibidor de transportadores ABC e é um controle importante para experimentos de populações secundárias. A adição de verapamil às amostras inibirá a capacidade dos transportadores ABC de efluir o corante Hoechst 33342. Portanto, uma população do l....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Soro fetal bovino (FBS)	Laboratórios HyClone, Inc.	Fisher Scientific - SH3007103	500 mL
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Gibco da Life Technologies	1001-023	pH 7,4 (1x) - 500 mL
Hoechst 33342	Tecnologias da Vida	H3570	10 mL
Verapamil	Sigma Ciências da Vida	V4629	1 g
Dimetilsulfóxido (DMSO)	Sigma Ciências da Vida	D8418	100 mL
Iodeto de propídio	Tecnologias da Vida	Pág. 3566	10 mL
Classificador de células FACSAria Fusion	BD Biociências