Hipofisite auto-imune pode ser reproduzido em ratos através da injeção de um extrato de proteínas do mouse pituitária.
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Artigo de método
Preparação de rato Imunogénio Pituitária para a indução de hipofisite Auto-Imune Experimental
Neste artigo
Resumo
Resumo
Hipofisite auto-imune é uma inflamação crônica da glândula pituitária causada ou acompanhada de auto-imunidade 1. Ela tem sido tradicionalmente considerada uma doença rara, mas relatórios tem aumentado significativamente nos últimos anos. Hipofisite, de fato, não raro se desenvolve como um "efeito colateral" em pacientes com câncer tratados com anticorpos que bloqueiam os receptores inibitórios expressa nos linfócitos T, como CTLA-4 2 e PD-1 receptores. Hipofisite auto-imune pode ser induzida experimentalmente pela injeção de ratos com proteínas pituitária misturado com um 3 adjuvante. Neste artigo de vídeo demonstramos como extrair proteínas de rato pituitária glândulas e como prepará-los de forma adequada para induzir hipofisite auto-imunes em camundongos SJL.
Protocolo
Protocolo Experimental
O primeiro passo neste protocolo experimental é coletar um grande número de glândulas pituitária de rato. O segundo passo é homogeneizar as glândulas para preparar um extrato de proteína. A terceira etapa é para emulsionar estas proteínas com uma mistura de hidrocarbonetos.
Passo 1: Recolha e armazenamento das glândulas pituitária de rato
A glândula pituitária do mouse fica na base do crânio em uma depressão do osso esfenóide chamada sela túrcica, cercado lateralmente pelos nervos trigêmeo e anteriormente pelo quiasma óptico. A glândula é composta de um grande lo....
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Discussão
Apesar do fato de que o primeiro paciente com hipofisite auto-imune foi relatada em 1962 4, a auto-antígenos patogênicos pituitária continuam a ser identificados 5. Modelos animais podem ser muito úteis para identificar esses auto-antígenos, auxiliando na descoberta de biomarcadores que são traduzíveis para o atendimento ao paciente. Este artigo tem demonstrado um procedimento simples para preparação de proteínas pituitária de uma forma que é adequada para induzir hipofisite auto-imunes em animais .......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder DK080351 para PC.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tubos Falcon de 15 ml | |||
| Tampão de homogeneização | |||
| Solução salina tamponada com fosfato | |||
| Cocktail de inibidores de protease | |||
| Homogeneizador Polytron | |||
| Ensaio BCA | Pierce, Thermo Scientific | 23225 | |
| Adjuvante completo de Freund’s (CFA) | Sigma-Aldrich | F-5881 | |
| Mycobacterium tuberculosis | BD Biosciences | 231141 | |
| Seringa gastight de 2,5 mL da Hamilton | |||
| Agulha microemulsificante de 22 gauge |
Referências
- Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
- Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophy....
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Reimpressões e permissões
