Microscopia intravital da Microcirculação cérebro de camundongo usando uma janela fechada Cranial

Summary

Microscopia intravital para seguir temporal e espacial eventos inflamatória e hemodinâmica na microcirculação pial.

Abstract

Este modelo experimental foi desenhado para avaliar a microcirculação do mouse pial durante aguda e crônica hemodinâmicos, fisiológicos e fisiopatológicos, condições inflamatórias e metabólicas, utilizando em microscopia de fluorescência in vivo. A janela fechada do crânio é colocado sobre o córtex parieto-occipital esquerdo do mouse. Microcirculação local é registrado em tempo real através da janela usando epi e iluminação de fluorescência, e as medições de diâmetros e vasos de glóbulos vermelhos (RBC) velocidades são executadas. RBC velocidade é medida em tempo real, utilizando correlação cruzada e / ou eritrócitos fluorescente etiquetados. Adesão de leucócitos e plaquetas aos navios pial e avaliação de perfusão e derrame vascular são feitos com a ajuda de marcadores de fluorescência rotulados como anticorpos Albumina-FITC e anti-CD45-TXR. Microcirculação podem ser repetidamente vídeo-gravadas durante vários dias. Que usamos para a primeira vez que o cérebro de microscopia intravital fechar a janela para o estudo da microcirculação pial seguir mudanças dinâmicas durante o curso da infecção por Plasmodium berghei ANKA em camundongos e mostram que a expressão da CM está associada a disfunções da microcirculação caracteriza-se por vasoconstrição, diminuição profunda no sangue fluxo e, eventualmente, colapso vascular.

Protocol

1. Craniotomia

A craniotomia em 8 a 10 semanas de ratos velhos precisa ser feita com antecedência, ^uma descritos anteriormente, exceto que uma barra de titânio não é colocado na cabeça do animal. A janela crônica crânio é um exame que permite a preparação estável da microcirculação pial mesmo meses depois de ser implantado. Normalmente, realizamos nossos estudos 2-3 semanas após a implantação janela craniana.

2. Microscopia intravital

1. Duas e três semanas após a craniotomia, a temperatura do corpo está marcada e, em seguida, o mouse é levemente anestesiados com isoflurano (4% para a indução,....

Discussion

O método de microscopia intravital aqui descrito fornece uma ferramenta única e poderosa para a observação detalhada da microcirculação pial no mouse. Ele permite destacar arteríolas e vênulas individuais e medir as mudanças de uma série de parâmetros como diâmetro do vaso, RBC velocidades, o fluxo sanguíneo, a adesão e rolamento de leucócitos, plaquetas e outros elementos do sangue, derrame vascular, pH e pO2 tecidual e potencialmente muitos outros aplicações. O em resposta vascular in vivo pode ser p.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurano	Baxter Internationl Inc.
Dil da tintura da carbocianina	, tecnologias da vida	D306
Albumina-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517
P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865