Microscopia intravital para seguir temporal e espacial eventos inflamatória e hemodinâmica na microcirculação pial.
Artigo de método
Microscopia intravital para seguir temporal e espacial eventos inflamatória e hemodinâmica na microcirculação pial.
Este modelo experimental foi desenhado para avaliar a microcirculação do mouse pial durante aguda e crônica hemodinâmicos, fisiológicos e fisiopatológicos, condições inflamatórias e metabólicas, utilizando em microscopia de fluorescência in vivo. A janela fechada do crânio é colocado sobre o córtex parieto-occipital esquerdo do mouse. Microcirculação local é registrado em tempo real através da janela usando epi e iluminação de fluorescência, e as medições de diâmetros e vasos de glóbulos vermelhos (RBC) velocidades são executadas. RBC velocidade é medida em tempo real, utilizando correlação cruzada e / ou eritrócitos fluorescente etiquetados. Adesão de leucócitos e plaquetas aos navios pial e avaliação de perfusão e derrame vascular são feitos com a ajuda de marcadores de fluorescência rotulados como anticorpos Albumina-FITC e anti-CD45-TXR. Microcirculação podem ser repetidamente vídeo-gravadas durante vários dias. Que usamos para a primeira vez que o cérebro de microscopia intravital fechar a janela para o estudo da microcirculação pial seguir mudanças dinâmicas durante o curso da infecção por Plasmodium berghei ANKA em camundongos e mostram que a expressão da CM está associada a disfunções da microcirculação caracteriza-se por vasoconstrição, diminuição profunda no sangue fluxo e, eventualmente, colapso vascular.
1. Craniotomia
A craniotomia em 8 a 10 semanas de ratos velhos precisa ser feita com antecedência, uma descritos anteriormente, exceto que uma barra de titânio não é colocado na cabeça do animal. A janela crônica crânio é um exame que permite a preparação estável da microcirculação pial mesmo meses depois de ser implantado. Normalmente, realizamos nossos estudos 2-3 semanas após a implantação janela craniana.
2. Microscopia intravital
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O método de microscopia intravital aqui descrito fornece uma ferramenta única e poderosa para a observação detalhada da microcirculação pial no mouse. Ele permite destacar arteríolas e vênulas individuais e medir as mudanças de uma série de parâmetros como diâmetro do vaso, RBC velocidades, o fluxo sanguíneo, a adesão e rolamento de leucócitos, plaquetas e outros elementos do sangue, derrame vascular, pH e pO2 tecidual e potencialmente muitos outros aplicações. O em resposta vascular in vivo pode ser p.......
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Este trabalho foi suportado por concessões R01-HL87290, R01-HL87290-S1 e R01-AI082610 dos Institutos Nacionais da Saúde para LJMC.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Isóflurano | Baxter Internationl Inc. | FDG9623 | |
| Corante carbocianina Dil | Molecular Probes, Life Technologies | D306 | |
| Albumina-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | |
| Ac anti-CD45-TxR | Invitrogen | MCD4517 | |
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
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