Conhecimento dos mecanismos moleculares subjacentes a transdução de gustativa tem apreciado recentemente avanços significativos, em grande parte devido ao uso de modelos animais. No entanto, a grande diversidade na sensibilidade gustativa e especificidade entre os estudos mamíferos garante no tecido humano. Descrevemos uma técnica de biópsia para coletar células gosto vivos de papilas na língua humana.
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Artigo de método
Técnica para coletar fungiformes (Taste) papilas da língua humana
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O sentido do paladar é fundamental para a vida humana. Ele informa o corpo sobre a qualidade dos alimentos que serão ingeridos potencialmente e estimula os processos metabólicos que preparam o tubo digestivo para a digestão. Constante progresso está sendo feito para a compreensão dos eventos bioquímicos e moleculares iniciais subjacentes transdução gosto (para uma revisão, Breslin e Spector, 2008 1). No entanto, o progresso até agora resultou em grande parte a partir de modelos animais. No entanto, uma vez que diferenças marcantes na especificidade do receptor e densidade do receptor variam entre as espécies, a transdução gosto humano só vai ser entendido usando tecido gosto humano. Aqui nós descrevemos uma técnica de biópsia para coletar humana papilas fungiformes, visíveis como estruturas arredondadas rosa anterior, cerca de 0,5 mm de diâmetro que contêm as papilas gustativas. Estas papilas biópsia são usadas para vários fins, incluindo o isolamento de células viáveis bud gosto, hibridização in situ imuno-histoquímica, e, através de técnicas de biologia molecular, a identificação de proteínas específicas do gosto da novela.
Protocolo
1. Introdução e Considerações Gerais
O procedimento geral envolve anestesia local de uma área (1 cm 2) pequena da superfície dorsal da língua anterior, seguida da remoção de um número (6-8) de fungiformes (gosto) papilas dessa área anestesiados com uma curva da mola micro -tesoura (McPherson-Vannas tipo # SR 5603, Roboz, Rockville, MD). A retirada fungiformes papilas são de aproximadamente 0,25 mm 3 cada. Há muito pouco não papilas de tecido (gosto) epitelial removida juntamente com cada papila. Forma papilas novo nesta área após 3-5 semanas e recuperar o funcionamento papilas gustativas (Spielman e Brand, observações ....
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Discussão
Uma vantagem notável a utilização de células humanas é a sua especificidade. O procedimento descrito aqui em detalhes fornece tecido língua para o isolamento de células gosto receptor dos seres humanos. Estas células gosto pode ser usado para estudos moleculares, buscando descobrir moléculas importantes para a transdução de informação, paladar e para os estudos de cálcio imagem que monitoram a atividade das células aos estímulos gosto. Além disso, o tecido língua fornecidas por este procedimento pode ser analisado com t.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo NIH R21 DC03969-01 (para JGB). Agradecemos ao Dr. Fritz Lischka para capturar células sabor único botão, Dr. Tauf Huque para a realização do RT-PCR mostrado na Figura 4B e D. Sr. Bayley e S. Ms. Alarcon para assistência técnica. M. Yanina Pepino é um companheiro apoiado por uma DA07313 NIDAT32 Washington University School of Medicine, St. Louis, MO (Cottler, LB PI).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| McPherson-Vannas. Borda de corte curva e afiada de 5 mm. Pente, largura da ponta de 0,2 mm, comprimento total de 3" | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5603, Roboz | |
| Pinça Dumont pequena | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-4915, Roboz |
Referências
- Breslin, P. A., Spector, A. C. Mammalian taste perception. Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).
- Miller, I. Anatomy of the peripheral taste system. Handbook of Olfaction and Gustation. Doty, R. I., Dekker, M. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).
- Figure 12.67.
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Reimpressões e permissões
