Neste protocolo, demonstramos a fabricação de uma matriz microactuator de posts verticalmente deslocadas em que a tecnologia é baseada, e como essa tecnologia base pode ser modificado para conduzir alto rendimento de cultura de células mecanicamente dinâmica em ambos cultura bidimensional e tridimensional paradigmas.
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Artigo de método
Plataformas microfabricated para cultura de células mecanicamente dinâmico
Neste artigo
Resumo
Resumo
A habilidade de sondar sistematicamente in vitro resposta celular a combinações de estímulos mechanobiological para engenharia de tecidos, descoberta de drogas ou estudos biológicos fundamentais célula é limitado pelo biorreator tecnologias atuais, que não pode, simultaneamente, aplicar uma variedade de estímulos mecânicos nas células em cultura. , A fim de resolver este problema, temos desenvolvido uma série de plataformas microfabricated projetado para tela para os efeitos dos estímulos mecânicos em um formato de alto rendimento. Neste protocolo, demonstramos a fabricação de uma matriz microactuator de posts verticalmente deslocadas em que a tecnologia é baseada, e ainda demonstrar como esta tecnologia de base pode ser modificada para conduzir alto rendimento de cultura de células mecanicamente dinâmica em ambos os bidimensionais e três dimensional paradigmas cultura.
Protocolo
A. descrição de dispositivos e operação
Dispositivos são fabricados utilizando litografia macia multicamadas 1 em PDMS (polidimetilsiloxano), e são capazes de, simultaneamente, gerando uma série de condições mecânicas em locais de células individuais cultura entre a matriz microfabricated. Neste protocolo, os passos para fabricar um conjunto de pneumático são acionadas microposts descrita pela primeira vez, seguido por etapas para modificar o dispositivo para permitir a cultura mecanicamente dinâmica em ambos os bidimensionais (2D) e tridimensionais paradigmas (3D) cultura. A abordagem descrita microfabricated aumenta o rendiment....
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Discussão
Embora conceitualmente simples, a fabricação de dispositivo faz um pouco de habilidade experimental e prática. Particularmente no caso de cultura de células em 2D, o alinhamento das camadas múltiplas em que o dispositivo pode ser desafiador, especialmente sobre uma matriz de grande área. Praticamente falando, nós podemos confiantemente atingir uma taxa de sucesso de 100% de alinhamento usando dispositivos com 50 mm de tolerância do espaçamento entre as características adjacentes em múltiplas camadas. Temos também demons.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Reconhecemos o apoio financeiro da Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada e da Canadian Institutes of Health Research (CHRPJ 323533-06), o programa de Bolsas de Pós-Graduação Ontário a CM, e os presidentes do Canadá Pesquisa em Micro e Nano Engenharia de Sistemas de YS, e em Mechanobiology a CAS.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Kit de monômero e reticulante PDMS Sylgard 184 | Dow Corning | ||
| Moldes em SU-8 | |||
| Agente de silanização: (tridecafluoro-1,1,2,2-tetrahidrooctil)-1-triclorosilano | United Chemical Technologies | ||
| Almofadas de espuma | Lojas de material artesanal, 1-2 mm de espessura | ||
| Transparências para impressão jato de tinta | Grand Toy | ||
| Placas de plexiglass | |||
| Grampo C | Loja de ferragens | ||
| Sistema de micromanipulador | Siskiyou, Inc. | ||
| Suporte de vácuo personalizado | |||
| Sistema de visão, zoom Navitar 12x | Navitar | ||
| Tubos de conexão | VWR international | Clay Adam Intramedic PE190 | |
| Aguilhas rombas 18G | Small Parts (www.smallparts.com) | ||
| Bomba micromembrana diafragmática excêntrica | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | |
| Válvulas solenoides | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | |
| Bloco distribuidor de válvulas solenoides | Pneumadyne | MSV10-1 | |
| Gerador de funções | |||
| 3-(trimetoxissilil) propil metacrilato | Sigma-Aldrich | ||
| Diacrilato de polietileno glicol 3,4 kDa | Laysan Bio Inc. | ||
| Polietileno glicol 8 kDa | Sigma-Aldrich | ||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | ||
| 1-vinil-2-pirrolidinona | Sigma-Aldrich | ||
| Reagentes padrão para cultura celular |
Referências
- Unger, M. A., Chou, H. P., Thorsen, T., Scherer, A., Quake, S. R. Monolithic microfabricated valves and pumps by multilayer soft lithography. Science. 288, 113-116 (2000).
- Schaffer, J. L. Device for the application of a dynamic biaxia....
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Reimpressões e permissões
