Abordagem da Cisterna Magna Estereotáxica para Entrega Terapêutica em Modelo de Camundongo

Resumo

Fonte: Joshi, K., et al. Abordagem cirúrgica estereotáxica para microinjetar o tronco encefálico caudal e a medula espinhal cervical superior através da cisterna magna em camundongos. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra a abordagem estereotáxica da cisterna magna para entrega direcionada ao tronco encefálico e à medula espinhal superior. Ao acessar a cisterna magna cheia de líquido cefalorraquidiano, essa abordagem permite injeções precisas em áreas de difícil acesso usando métodos estereotáxicos padrão.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Abertura da membrana cisternal

1. Use a pinça de Dumont angulada para agarrar a dura-máter, que se estende do osso occipital ao atlas. Pegue a dura-máter perto do osso occipital e use a tesoura de mola para fazer uma pequena abertura (~0,5 a 1,5 mm) na dura-máter.
   NOTA: Neste local rostral, o espaço entre o tronco encefálico e a dura-máter sobrejacente é mais largo, proporcionando amplo espaço para a manipulação segura da dura-máter.
2. Use a tesoura de mola para levantar a dura-máter e abri-la ainda mais. O tamanho da janela depende do alvo.
   NOTA: Uma janela maior será necessária ao fazer várias injeções longitudinais ou bilaterais; Uma pequena janela será suficiente ao fazer injeções unilaterais ou de linha média únicas.
3. Assim que a dura-máter for aberta, drene o excesso de líquido cefalorraquidiano com uma ponta estéril.

2. Identificação de pontos de referência e ponto zero

1. Veja a superfície dorsal do tronco encefálico com pontos de referência detalhados através da dura-máter aberta. O obex, o ponto onde o canal central se abre para o IV ventrículo, é o ponto zero ântero-posterior e mediolateral padrão.

3. Injecção do alvo

1. Baixe a pipeta ou seringa para o alvo utilizando o braço estereotáxico e injecte a solução como nas abordagens estereotáxicas padrão. Deixe no local por 1-5 minutos após a injeção para evitar um rastro de agulha ao usar volumes entre 3-50 nL. Em seguida, levante a pipeta ou seringa usando o braço estereotáxico.
2. Repita a etapa 3.1. para vários destinos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pinça angular, Dumont 5/45	FST	11251-35	Apenas para agarrar dura
Tesoura de mola, Vannas 2,5mm com caixa de acompanhamento	FST	15002-08	Tesoura apenas para abrir dura-máter, caixa para elevar o corpo
Micromanipulador estereotáxico	Kopf	1760-61	Anexado ao suporte do eletrodo para ajustar a posição com base nas coordenadas
Conjunto da estrutura estereotáxica em 'U' e placa de base intracelular	Kopf	1730-B, 1711	Estrutura para cirurgia
Aplicadores estéreis com ponta de algodão	Puritan	25-806 10WC	Absorvendo sangue do campo cirúrgico