Enxerto muscular como estratégia cirúrgica para restaurar o fluxo sanguíneo para o cérebro de camundongos após acidente vascular cerebral

Resumo

Fonte: Paro, M. R., et.al. Um modelo para tratamento de encefalomiossinangiose após acidente vascular cerebral induzido por oclusão da artéria cerebral média em camundongos. J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra um procedimento cirúrgico para enxertar um músculo vascularizado na superfície do cérebro após oclusão transitória da artéria cerebral média. O enxerto promove a formação de novos vasos sanguíneos na região isquêmica, aumentando o suprimento de oxigênio e nutrientes. Com o tempo, o músculo integrado suporta a sobrevivência neuronal e auxilia na recuperação pós-AVC.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Cirurgia de encefalomiossinangiose (EMS)
   1. Após 60 min de oclusão da artéria cerebral média (MCAo), randomize os camundongos em grupos MCAo-only ou MCAo + EMS. Realize EMS 4 h após MCAo (grupo MCAo + EMS) ou cirurgia simulada para experimentos selecionados (grupo somente EMS). Troque por um novo par de luvas cirúrgicas estéreis antes da cirurgia.
      NOTA: Os camundongos se recuperaram da anestesia após 60 minutos de MCAo e foram reanestesiados antes da cirurgia EMS.
   2. Para os grupos que recebem EMS (MCAo + EMS ou grupos somente EMS), faça uma incisão na pele de 10-15 mm com tesoura, estendendo-se de 1-2 mm rostral à orelha direita a 1-2 mm caudal ao olho direito.
      NOTA: Tesouras estéreis foram usadas para evitar danos acidentais aos músculos temporais por baixo.
   3. Retraia os retalhos cutâneos usando pinças e identifique visualmente o músculo temporal e o crânio.
   4. Disseque sem rodeios o músculo temporal para longe do crânio usando uma tesoura com uma técnica de espalhamento. Realize uma miotomia de 2-3 mm direcionada ventralmente ao longo da borda caudal do músculo para facilitar a reflexão ventral.
   5. Realize uma craniotomia de ~ 5 mm de diâmetro no crânio abaixo do músculo temporal refletido usando uma micro broca.
   6. Remova a dura-máter com uma pinça para expor a superfície pial do cérebro. Tenha muito cuidado para evitar lesões acidentais no cérebro.
   7. Suturar a borda dorsal do músculo temporal ao tecido subcutâneo do retalho cutâneo dorsal com filamentos monocryl 6-0, tornando-o rente ao córtex cerebral exposto.
   8. Feche a incisão na pele com sutura de monofilamento 6-0. Coloque o mouse de volta em sua gaiola e monitore até a recuperação da anestesia. Retorne o mouse para sua instalação de alojamento.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
6-0 monocryl sutura	Ethilon	697G
70% etanol para higienizar a superfície operacional	Walgreen
Bupivacaine 0,25% solução	Midwest Vet
Braçadeiras para retração tecidual	Roboz
Doccal sutura com revestimento de nylon	Doccal corporation Sharon MA	602145PK10Re
Almofada de aquecimento elétrica para superfície
Anestesia com isoflurano	Piramal Critical Care Inc
Aparelho de administração de isoflurano	-- B6Surgivet (Isotech 4)
Micro broca	Harvard Aparelho Pinças
de microdissecação, curvadas x2	Piramal Critical Care Inc
Painel de angiogênese de camundongo arrat	R&D biotech	ARY015
Chave de agulha	Ethilon
Operating microscópio	Olympus
Superfície de operação	Olympus
Tesoura cirúrgica	Roboz

operacional