Entrega de medicamentos oftálmicos para neuromodulação não invasiva em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Zhan, J., et al. Estratégias não invasivas para manipulação crônica da atividade neuronal controlada por DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra um método de administração oftálmica não invasiva de medicamentos para neuromodulação direcionada. A droga é administrada por meio de colírios, absorvida pela circulação, atravessa a barreira hematoencefálica e ativa receptores neuronais específicos.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Entrega repetitiva de N-óxido de clozapina (CNO) usando colírios

1. Aclimatar os animais ao manuseio por meio de 3-4 dias antes da administração do colírio.
2. Dissolva o N-óxido de clozapina (CNO, 5 mg) em 1 mL de solução salina estéril a 0,9% (solução estoque: 5 mg CNO/mL). Mantenha a solução refrigerada a 4°C.
3. Pese cada camundongo antes de iniciar o experimento para determinar a quantidade de CNO a ser entregue. Use uma gota de 1-3 μL (por olho) para atingir 1,0 mg de CNO/kg de peso corporal.
   NOTA: Como exemplo, um camundongo de 20 g deve receber colírios bilaterais (2 μL cada).
4. Administre o colírio durante a fase inativa (leve) dos camundongos, 2 h antes de as luzes se apagarem (zeitgeber time (ZT) 10). Nos casos em que o CNO precisa ser administrado durante a fase ativa (escura) dos camundongos, certifique-se da presença de luz vermelha fraca para o manuseio adequado dos animais.
   NOTA: Devem ser tomadas precauções para evitar a interrupção do ciclo circadiano (e claro/escuro) dos animais experimentais.
   1. Usando uma micropipeta P10, carregue a quantidade necessária (1-3 μL) de solução de CNO para obter 1,0 mg de CNO/kg.
      NOTA: Use uma ponta de pipeta nova e estéril para cada colírio. Neste conjunto de experimentos, foram realizados colírios bilaterais de CNO; no entanto, se for necessária uma concentração mais baixa de CNO, colírios unilaterais também podem ser aplicados.
   2. Imobilize o mouse através da nuca.
   3. Expulse lentamente a solução até formar uma gota estável na ponta da pipeta.
   4. Aproxime cuidadosamente a gota da córnea do olho do camundongo até que a solução seja administrada. A ponta da pipeta nunca deve entrar em contato com o olho do mouse.
   5. Solte o mouse, colocando-o de volta em sua gaiola inicial.
5. Repita este procedimento todos os dias durante 5 dias.
   NOTA: Esta duração pode ser ajustada de acordo com os requisitos experimentais.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Pó liofilizado ≥96% (eletroforese em gel de agarose)
Camundongos C57BL/6J	The Jackson laboratory	#000664	camundongos machos, 3 meses de idade
Capilares	Drummond Empresa Científica	#3-000-203-G/X	Diâmetro externo: 1,14 pol.
Clozapina-N-óxido	Sigma	#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	Isoflurano,
USP Microinjetor III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Injetor Programável de Nanolitros
Mídia de montagem	Invitrogen	#P36930	Reagente antidesbotamento Prolong Gold