Reconexão direta dos nervos cervicais para restaurar a mobilidade dos membros anteriores em um camundongo

Resumo

Fonte: Gao, Z., et al. Um modelo de camundongo de anastomose direta através da via pré-espinhal para cirurgia de transferência de nervo cruzado. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo demonstra a restauração do movimento do membro anterior em um camundongo por meio da reconexão direta do nervo cervical. Começa com um camundongo com o membro anterior direito paralisado devido a um nervo C7 direito seccionado em sua raiz nervosa. O nervo C7 esquerdo é cortado, guiado para a direita pela via pré-espinhal e suturado com o nervo C7 direito. O local cirúrgico é então limpo e fechado.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

Foram utilizados camundongos C57BL/6N machos adultos com oito semanas de idade.

1. Configuração pré-operatória

1. Garanta um estoque adequado de instrumentos cirúrgicos esterilizados e autoclavados, equipamentos, medicamentos analgésicos e anestésicos.
2. Garanta espaço de trabalho adequado em uma mesa de operação.
3. Prepare a mesa de operação usando uma placa de espuma cirúrgica personalizada coberta de fraldas como cama para o mouse. Fixe uma almofada de aquecimento na placa de espuma com fita adesiva coberta com gaze estéril.
4. Crie afastadores dobrando uma agulha de acupuntura usando uma pinça vascular, dobrando-a ao meio e, em seguida, dobrando a ponta da agulha de acupuntura dobrada em um gancho. Fixe uma tira de borracha na ponta da agulha de acupuntura e use uma tachinha para fixar a ponta da tira de borracha na placa de espuma.
5. Calibre o estereomicroscópio; escolha um estereomicroscópio com uma distância de foco adequada. Cubra os botões de zoom/foco com papel alumínio esterilizado para permitir que o cirurgião os ajuste durante a operação. A folha de alumínio esterilizada foi colocada nos botões de zoom/foco, permitindo que o cirurgião a usasse com luvas estéreis.

2. Anestesia e preparação do camundongo

1. Pese o camundongo e anestesieste-o de acordo com seu peso corporal (isoflurano 3%). Certifique-se de que o mouse não responda quando os espaços interdigitais de sua pata forem comprimidos para confirmar a profundidade da anestesia. A profundidade adequada da anestesia deve ser mantida durante todo o procedimento (isoflurano a 1%).
2. Aplique pomada oftálmica bilateralmente nos olhos para evitar irritação ou ressecamento da córnea durante a cirurgia.
3. Prepare o local da cirurgia raspando o pelo do pescoço e do peito com um aparador automático. Remova e limpe o cabelo solto.
4. Coloque o mouse em decúbito dorsal na almofada de aquecimento coberta com gaze estéril. Mantenha a temperatura do mouse em 37 °C durante toda a operação. Fixe o mouse com fita adesiva para fazer com que os membros anteriores sejam abduzidos horizontalmente e evitar que os membros posteriores e a cauda se movam. Um campo cirúrgico descartável esterilizado com abertura apropriada foi colocado nos camundongos.

3. Procedimento operatório

1. Injete tramadol como analgesia preventiva (20 mg/kg, intraperitoneal ou i.p.). Marque a incisão transversal na borda superior da clavícula. Use três ciclos alternados de esfoliação de solução de desinfecção iodófora e etanol para desinfetar o local cirúrgico. Confirme a profundidade da anestesia com uma pitada no dedo do pé antes da cirurgia.
2. Trabalhando sob um microscópio, faça uma incisão transversal de 4 mm ao longo da marca usando um bisturi estéril. Amplie a incisão durante o procedimento, conforme necessário.
3. Dissecar sem corte através da fáscia subcutânea e identificar a borda inferior da glândula submandibular. Puxe a glândula submandibular para cima para expor a fossa supraclavicular e o esterno.
   NOTA: Pode haver vasos sanguíneos de pequeno calibre nesta área. O eletrocautério pode ser usado para parar o sangramento.
4. Faça uma incisão parcial da esternotomia mediana (~ 4 mm) incisando o esterno da cabeça à cauda ao longo da linha média. Proteja a pleura, o coração e os vasos sanguíneos durante a esternotomia.
5. Identifique o músculo esterno-hióideo. Puxe o esterno suavemente com dois pequenos afastadores personalizados feitos de agulhas de acupuntura e identifique o músculo esterno-hióideo, sobre a traqueia e o esôfago. Retraia esse músculo para expor a artéria carótida, a veia jugular interna, o nervo frênico, o nervo vago, a traqueia e o esôfago.
   NOTA: Retraia suavemente o esterno para evitar pneumotórax aberto. Ao contrário dos humanos, o esôfago do camundongo não está atrás da traqueia, mas adjacente à traqueia no lado esquerdo.
6. Identifique o plexo braquial esquerdo. Na borda lateral da veia jugular interna esquerda, puxe a fáscia e o tecido adiposo para fora para expor o plexo braquial. Procure o tronco superior, composto pelos nervos cervical ou C5 e C6, que possuem três ramos. Identifique o tronco médio composto pelo nervo C7 e o tronco inferior composto pelos nervos C8 e torácico ou T1, ao longo do tronco superior até a cauda do camundongo.
   NOTA: Existem vasos sanguíneos longitudinais na superfície do plexo braquial. Use eletrocautério para evitar sangramento. Ao separar o plexo braquial esquerdo, proteja o canal quiloso para evitar uma fístula quilosa.
7. Colha o nervo C7 esquerdo. Disseque a divisão anterior e a divisão posterior do tronco médio (nervo C7) distalmente ao nível da divisão para a medula sob a clavícula e bloqueie o nervo C7 com 0,1 mL de lidocaína a 2% por infusão local no tronco nervoso. Ressecção o nervo C7 com uma tesoura de mola Vannas em seus pontos de fusão com o cordão lateral e o cordão posterior. Apare o nervo C7 de forma que o comprimento de cada divisão seja semelhante.
   NOTA: As divisões anterior e posterior do nervo C7 e as divisões anterior e posterior dos troncos superior e inferior percorrem uma longa distância antes da confluência, portanto, o nervo C7 deve ser liberado o suficiente antes da ressecção. Na verdade, o nervo C7 nem sempre é dividido em duas divisões; Às vezes, é dividido em três divisões ou mesmo em quatro em casos raros.
8. Remova a lâmina ventral C6 esquerda. Proteja cuidadosamente o nervo frênico e corte o músculo escaleno anterior ao nível do segmento C6 para expor a raiz nervosa C7. Corte pequenos ramos do nervo C7 inervando o músculo paraespinhal com micropinças. Retire o nervo C7 suavemente e excise a lâmina ventral C6 com cuidado.
   NOTA: Há uma proeminência óssea entre o lado medial da artéria carótida esquerda e o lado lateral do esôfago. Esta proeminência óssea é a lâmina ventral da 6ª vértebra cervical. O músculo longitudinal da borda lateral da lâmina ventral C6 é o músculo escaleno anterior, e o nervo frênico corre na superfície do músculo escaleno anterior.
9. Colha o nervo C7 certo. Corte o músculo escaleno anterior do lado direito, semelhante ao lado esquerdo, e atravesse a raiz nervosa C7 direita perto do forame intervertebral. Disseque o nervo C7 direito de seu nível de divisão.
   NOTA: Corte cuidadosamente o nervo C7 direito para evitar danos aos vasos sanguíneos sob o nervo.
10. Transfira o nervo C7 esquerdo.
    1. Remova o longo colo muscular ao lado dos corpos vertebrais parcialmente em ambos os lados. Separe e expanda sem corte o espaço entre a traqueia-esôfago e o corpo vertebral.
    2. Envie uma sutura de náilon 5-0 de meia dobra do lado direito do corpo vertebral para o lado esquerdo através da via pré-espinhal.
    3. Engate o nervo C7 esquerdo com um tubo de infusão e guie o nervo para o lado direito através da via pré-espinhal.
    4. Retraia a traqueia e o esôfago suavemente e coapte as divisões anterior e posterior do nervo C7 esquerdo para a raiz nervosa C7 direita sem tensão usando suturas de nylon 12-0. Suturar o epineuro ao redor dos nervos com 4-5 pontos para coaptar os nervos fortemente.
       NOTA: É crucial escolher um tubo de infusão de plástico de espessura apropriada. Um tubo muito fino pode danificar o nervo, e um tubo muito grosso pode danificar a traqueia e o esôfago. Além disso, o espaço entre a traqueia-esôfago e o corpo vertebral é um espaço em forma de "V", e cortar parte do longo colo muscular pode encurtar a via de transferência.

4. Fechamento

1. da ferida Irrigue a ferida com solução salina normal estéril e seque-a com gaze estéril.
2. Suturar o esterno e fechar a pele com suturas monofilamentares 5-0.

5. Cuidados pós-operatórios

1. Aguarde o mouse acordar da anestesia. Transfira o mouse para uma gaiola limpa sem material de cama, mas aquecido com um cobertor de aquecimento. Observe o mouse até que ele seja ambulatório. Utilizar tramadol (20mg/kg, i.p.) como analgesia pós-operatória.
2. Coloque os ratos em uma gaiola de recuperação e monitore-a até a recuperação. Restaure a água e a dieta dos ratos após a operação. Monitore os camundongos no pós-operatório em busca de sinais de comprometimento ou infecção todos os dias, incluindo desnutrição, postura curvada e pêlo despenteado. Duas semanas após a cirurgia, deve ocorrer a retirada da sutura.
   NOTA: Aplicar pomada de eritromicina na superfície da ferida todos os dias por três dias consecutivos.
3. Se forem observadas complicações, como edema da ferida, devem ser resolvidas imediatamente.

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