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Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.
1. Teste de Ativação Voluntária Tônica (TVA)
- Determine bilateralmente a contração isométrica voluntária máxima (CIVM) de cada músculo. Para cada movimento (ou seja, dorsiflexão e flexão plantar), instrua os indivíduos a contrair ao máximo o músculo contralateral examinado (por exemplo, tibial anterior direito, TA) 4 vezes (~ 5 s de contrações separadas por 60 s de repouso) enquanto o sujeito está sentado na postura descrita acima.
- Calcule o valor máximo de atividade muscular durante cada CIVM (ou seja, a média dentro de uma janela de 100 ms centrada em torno da eletromiografia máxima retificada e suavizada, EMG) das últimas três tentativas, a média dos três valores e 15 ± 5% da média de cada músculo MVIC.
CUIDADO: Uma % de CIVM maior pode ser usada, mas pode não ser viável em coortes clínicas (por exemplo, pessoas pós-AVC).
2. Cadastro no Sistema de Neuronavegação
- Posicione o rastreador do sujeito, seja uma faixa para a cabeça ou óculos, com marcadores refletivos na cabeça do sujeito no lado oposto ao hemisfério estimulado, para que o rastreador não obstrua o posicionamento da bobina durante a estimulação de cada ponto da grade.
CUIDADO: No caso de ser usada uma faixa de cabeça, certifique-se de que ela esteja bem ajustada na cabeça do sujeito, mas não muito apertada, pois pode causar dor de cabeça após um longo período de tempo. - Verifique a posição correta da câmera de captura de movimento colocando o rastreador de assunto, o ponteiro e o rastreador de bobina em seu volume de captura. Efetue o registo da imagem do objeto colocando a ponta do ponteiro nos 4 pontos de referência anatómicos (ver Figura 1A).
- Depois que todos os pontos anatômicos forem amostrados, verifique se o registro ocorreu com precisão, colocando a ponta do ponteiro em vários pontos sobre o crânio do sujeito (ou seja, estágio de validação). Se a distância da ponta do ponteiro à pele reconstruída for inferior a 3 mm, prossiga para o experimento de estimulação magnética transcraniana (EMT); caso contrário, repita o registro da imagem do assunto até que os valores de erro desejados sejam obtidos. Durante o experimento, repita o registro se o rastreador de assunto for movido acidentalmente.
3. Estimulação Magnética Transcraniana
- Use os mesmos parâmetros metodológicos durante o repouso e a ativação voluntária tônica (TVA).
- Aplique estímulos de pulso único no local ideal (ou seja, ponto quente; consulte o parágrafo seguinte para obter mais detalhes) do músculo examinado. Aplique cada estímulo aleatoriamente a cada 5-10 s para evitar a antecipação do estímulo e minimizar os efeitos de transferência do pulso anterior para o subsequente.
- Se as duas unidades TMS forem usadas simultaneamente, defina-as no modo padrão ou simultâneo. O modo padrão aplica um pulso mais fraco do que uma única unidade, enquanto o modo simultâneo aplica um pulso mais forte do que uma única unidade. O uso de qualquer um deles pode ser baseado nas necessidades do protocolo e no número total de estímulos.
- Use uma bobina de cone duplo para induzir uma corrente intracraniana póstero-anterior. Se necessário, use o sistema de neuronavegação para controlar a bobina manualmente e corrigir sua posição em relação ao ponto estimulado desejado antes de cada estímulo.
- Entre sessões e sujeitos, randomize a ordem do músculo e do hemisfério examinados. Sempre administre a condição de TVA após a condição de repouso para evitar qualquer interferência no teste em repouso (por exemplo, fadiga das vias descendentes devido ao teste de TVA).
- Determine bilateralmente o ponto quente de ambos os músculos.
- Encontre a intensidade supralimiar, que será usada durante a caça de pontos quentes, aplicando um único estímulo sobre o ponto centralizado próximo à fissura inter-hemisférica (veja os quadrados azul e vermelho na Figura 1B). Use este local porque ele está localizado no locus da área motora da perna.
- Comece em baixa intensidade (por exemplo, 30% de saída máxima do estimulador; MSO) e aumentar gradualmente a intensidade da EMT em incrementos de 5%, até atingir a intensidade que provoca um potencial evocado motor (PEmáx) com amplitude pico a pico superior a 50 μV em todos os músculos contralaterais examinados por 3 estímulos consecutivos.
- Determine imediatamente após cada estímulo se um MEP foi obtido com base nas formas de onda brutas e nas amplitudes pico a pico (janela de pesquisa: 20-60 ms após o início da EMT) de todos os músculos examinados.
- Aplique um pulso TMS em cada ponto da grade (total de 36 estímulos). Após a conclusão do protocolo de hot spot, transfira os valores de amplitude e latência de cada spot para todos os músculos contralaterais em uma planilha e classifique a amplitude de alta para baixa e a latência de baixa para alta. Identifique o ponto quente de TA contralateral e sóleo (SOL) como o local na grade com a maior amplitude e a menor latência.
CUIDADO: Se a maior amplitude e a menor latência não estiverem no mesmo ponto, defina o ponto quente usando a maior amplitude.
- Determine bilateralmente o limiar motor em repouso (TMR) de cada músculo.
- Selecione o ponto da grade no sistema de neuronavegação que corresponde ao ponto quente do músculo examinado.
- Use um método adaptativo de busca de limiar para determinação RMT dos músculos examinados. Defina a intensidade inicial e o tamanho do passo em 45 e 6% MSO, respectivamente. Execute a busca de TMR duas vezes para cada músculo e use a média para a avaliação subsequente da resposta corticomotora (RMC).
- Avalie bilateralmente TA e SOL CMR durante o repouso.
- Selecione o ponto da grade no sistema de neuronavegação que corresponde ao ponto quente do músculo examinado. Aplique 10 pulsos únicos de TMS a 1,2 RMT do músculo examinado.
- Antes de cada estímulo, instrua o sujeito a ficar parado e relaxar os músculos examinados bilateralmente e monitore a atividade de todos os músculos usando um feedback visual em tempo real exibido na tela do computador. Caso algum músculo esteja ativo antes ou depois da EMT, descarte esse teste e aplique um pulso único adicional. Repita até que 10 formas de onda para cada músculo contralateral examinado em repouso tenham sido coletadas.
- Avalie bilateralmente o TA e o SOL CMR durante o TVA.
- Selecione o ponto da grade no sistema de neuronavegação que corresponde ao ponto quente do músculo examinado.
- Peça aos indivíduos que contraiam o músculo examinado a 15 ± 5% da CIVM e apliquem 10 pulsos únicos de EMT a 1,2 RMT. Instrua os sujeitos a manter a linha de movimento suavizada (amplitude quadrada média de 0,165 s) do músculo examinado, TA ou SOL, dentro dos dois cursores horizontais (faixa de CIVM: 15 ± 5%) e manter essa contração nesse nível por alguns segundos.
- Quando TA for o músculo examinado, peça aos sujeitos que puxem levemente contra as alças da perna contralateral (ou seja, a perna com o músculo examinado contralateral ao hemisfério estimulado). Quando o SOL for o músculo examinado, peça aos sujeitos que empurrem levemente para baixo contra a bota na perna contralateral.
- Monitore a atividade muscular do músculo ativo examinado e dos músculos restantes em repouso usando uma exibição de feedback visual em tempo real em uma tela de computador. Descarte esse estímulo e aplique um pulso único adicional novamente se a atividade do músculo examinado estiver abaixo ou acima da faixa predeterminada, ou se qualquer outro músculo for ativado. Colete 10 tentativas enquanto o músculo examinado é ativado no intervalo predeterminado.