Administração Intravenosa de Nanopartículas Terapêuticas em Modelo de Glioblastoma Murino

Resumo

Fonte: Kim, B. D., et al. Entrega de nanopartículas de uma carga útil de oligonucleotídeos em um modelo animal de glioblastoma multiforme. J. Vis. Exp. (2024)

Este vídeo demonstra a injeção intravenosa de nanopartículas terapêuticas em um camundongo portador de glioblastoma. O método permite a entrega direcionada através da barreira hematoencefálica e oferece suporte a imagens não invasivas para avaliar a biodistribuição de nanopartículas e a eficácia terapêutica em tumores cerebrais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Administração de MN-anti-miR10b

NOTA: Neste estudo, as injeções foram feitas uma vez por semana durante 6 semanas, começando 7 dias após o implante, mas o mesmo protocolo pode ser usado para várias frequências de injeção.

1. Pese o camundongo e calcule o volume de MN (nanopartícula magnética)-anti-miR10b para administrar ao camundongo. As doses de MN-anti-miR10b são administradas a 20 mg Fe (ferro) / kg em modelos murinos de GBM (glioblastoma multiforme). Por exemplo, um camundongo de 20 g recebe uma dosagem de 80 μL de 5 mg de Fe/mL de MN-anti-miR10b. Os camundongos de controle recebem um volume igual de PBS (solução salina tamponada com fosfato) consistente com este esquema de dosagem.
2. Prepare uma seringa de 28G com a dose de MN-anti-miR10b e certifique-se de que não há bolhas na solução injetável.
3. Anestesiar o camundongo sob 2% -4% de isoflurano para indução e 1,5% -2% para manutenção com uma taxa de fluxo de 1,5 L / min em uma caixa de indução. Mova o mouse para um cone nasal e continue a administrar anestesia. Verifique a profundidade da anestesia e aplique pomada veterinária.
4. Esterilize a cauda com um pano de isopropanol a 70% e deixe o excesso de álcool secar.
5. Gire a cauda para posicionar as veias caudais laterais no topo da cauda. Em seguida, apontando para a veia, insira a agulha na cauda e estabeleça um vácuo puxando o êmbolo para trás.
6. Insira a agulha até que o sangue entre na seringa, indicando a entrada bem-sucedida na veia.
7. Injete lentamente o MN-anti-miR10b e retraia a agulha após o parto completo. Aplique pressão no local da injeção com gaze até que o sangramento pare.
8. Remova o mouse do cone do nariz. Monitore o camundongo até que esteja totalmente recuperado e ambulatório.
   NOTA: A administração em bolus de nanopartículas pode causar desconforto respiratório. Monitore cuidadosamente o mouse e aplique imediatamente leves compressões torácicas se houver sinais de dificuldade respiratória.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Athymic nude "J:NU" camundongos	Jackson Laboratory	RRID:IMSR_JAX:007850	Modelo de camundongo imunocomprometido
70% de álcool isopropoílico lenço umedecido	Cardinal	MW-APL	Toalhete anti-séptico tópico para implantação de tumor e injeção na veia caudal
Isoflurano	Covetrus	11695067772	Anethesia
Vaporizador de isoflurano	SOMNI Scientific	VS6002	Aparelho de anestesia
Seringa de insulina 1CC 29G X 1/2"	Becton, Dickinson	324704	Seringa para injeção de D-luciferina e injeção de nanopartículas na veia da cauda