Visualização mediada por nanopartículas da remodelação endolisossômica em células infectadas por bactérias

Resumo

Fonte: Zhang, Y., et al. Aplicação de Nanopartículas Fluorescentes ao Estudo da Remodelação do Sistema Endolisossômico por Bactérias Intracelulares. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo demonstra o uso de nanopartículas fluorescentes para visualizar a remodelação endolisossômica em células epiteliais humanas infectadas por bactérias intracelulares. Após a invasão bacteriana, os patógenos manipulam o citoesqueleto do hospedeiro e o sistema endolisossomal, formando vacúolos com projeções tubulares que alteram o transporte das vesículas. Nanopartículas marcadas com fluorescência são então usadas para rastrear essas alterações, permitindo imagens de alta resolução de eventos de tráfego intracelular induzidos por patógenos.

Protocolo

1. Cultura de células HeLa
   1. células HeLa que expressam permanentemente LAMP1-GFP (glicoproteína de membrana associada ao lisossomo 1-proteína fluorescente verde) são cultivadas no meio Eagle modificado de Dulbecco, ou DMEM com 10% de soro fetal de bezerro (FCS) e cultivadas a 37 ° C em uma atmosfera contendo 5% de CO₂.
   2. Semeie as células a uma densidade de 50.000 por poço em uma lâmina de câmara de 8 poços (Ibidi) e incube durante a noite (O/N).
2. Cultura de Bactérias
   1. Use Salmonella enterica sorovar Typhimurium NCTC 12023 e....

Resultados

Figura 1. Esquema para a preparação de células HeLa para imagens de células vivas. As células HeLa foram semeadas em lâminas de câmara, simuladas ou infectadas com várias cepas de Salmonella por 30 min, lavadas 3 vezes com PBS e .......

Materiais