Obtenção de amilóides citotóxicos após infecção bacteriana de células endoteliais pulmonares de ratos

Neste artigo

Resumo

Fonte: Balczon, R., et al. Métodos para detecção de amilóides citotóxicos após infecção de células endoteliais pulmonares por Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra o procedimento para gerar sobrenadante citotóxico a partir de células endoteliais pulmonares após infecção por Pseudomonas aeruginosa. Ele descreve como as proteínas efetoras bacterianas interrompem a estrutura da célula hospedeira e induzem a liberação de oligômeros amilóides citotóxicos no sobrenadante.

Protocolo

Geração de sobrenadantes citotóxicos:

Culturas primárias de células endoteliais microvasculares pulmonares de ratos (PMVECs) foram obtidas do Cell Culture Core Facility do Centro de Biologia Pulmonar da Universidade do Sul do Alabama.

Para a geração de sobrenadantes citotóxicos, coloque 2 x 10⁶ células em placas individuais de 150 cm e cresça por 3 a 4 dias até que a confluência seja alcançada. Use duas placas por experimento.
Para produzir sobrenadante, lave um dos dois pratos de 150 cm de PMVECs com solução salina tamponada com fosfato, tripsinize e conte as células. Lave o outro prato de PMVECs co....

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Resultados

Figura 1. Efeitos da inoculação de P. aeruginosa na morfologia do PMVEC. Uma monocamada confluente de PMVECs antes (A) e quatro horas após a adição (B) da cepa PA103 de P. aeruginosa. As lacunas podem ser vistas claramente na mono.......