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Isolamento de colônias bacterianas direcionadas usando degradação de hidrogel com padrão de luz

September 26th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Fattahi, N., et al. Interfaces de hidrogel fotodegradável para triagem, seleção e isolamento de bactérias. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo demonstra a extração de colônias bacterianas de um hidrogel fotodegradável usando luz UV. Uma colônia específica é selecionada e uma exposição à luz padronizada é projetada para iniciar a degradação localizada do hidrogel. Após ajustar a intensidade e a duração da luz, a luz UV é aplicada, liberando a colônia. A colônia é então aspirada através de tubos e transferida para um tubo para análise a jusante.

Protocol

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1. Cepas bacterianas e protocolos de cultura

  1. Colônias de bactérias em placas de ágar suplementadas com meios de crescimento apropriados. Neste relatório, B. subtilis (cepa 1A1135, Bacillus Genetic Stock Center) é cultivada em ATGN (0,079 M KH2PO4 (di-hidrogenofosfato de potássio), 0,015 M (NH4)2SO4 (sulfato de amônio), 0,6 mM MgSO4·7H2O (sulfato de magnésio heptahidratado), 0,06 mM CaCl2·2H2O (cloreto de cálcio di-hidratado), 0,0071 mM MnSO4·H2O (sulfato de manganês(II) monohidratado), 0,125 M FeSO4 · 7H2O (sulfa....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Figura 1: Formação de hidrogel em lamínulas de vidro tiolado. (A) Espaçadores com espessura de 12,7 μm são colocados em dois lados opostos de uma lamínula de base contendo grupos tióis reativos. (B) A solução precursora de hidrogel é pipetad.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(3-mercaptopropil)trietoxissilanoSigma-Aldrich175617-25G> 95%
Detergente em pó AlconoxAlconox1104 
Sulfato de amônioFisher QuímicaA702-500Certificado ACS Granular
Autoclave SK300CYamato Científico18016 
Bacillus subtilis 1A1135Centro de Estoque Genético Bacillus1A1135 
Microscópio vertical de campo claroCorporação OlympusBX51 
Cloreto de cálcio anidroFisher QuímicaC614-500Para pellets de dessecadores, malha 4-20
Centrífuga 5702Eppendorf5702 
Ácido cítrico monohidratadoSigma-AldrichC1909-500GReagente ACS, > 99,0%
D-glicose (dextrose)Soluções para ciências da vida da VWR Amresco0188-1KG 
Base de elastômero de silicone DOWSIL 184Corporação Dow Silicones Temperatura de armazenamento: -30-60 °C
Agente de cura de elastômero de silicone DOWSIL 184Corporação Dow Silicones Temperatura de armazenamento: < 32 C
Espectrofotômetro de microplacas EPOCH2Instrumentos BioTekÉpoca 2 
Escherichia coli ATCC 25922Thermo Fisher CientíficoR19020 
Etanol anidroFisher Química459844 
Vidro de cobertura do microscópio FisherbrandFisher Científico12540UMA 
Lâminas de microscópio premium Fisherfinest simplesFisher Científico12-544-4 
Solução de peróxido de hidrogênioSigma-Aldrich216763-500MLContém inibidor, 30% em peso em H2O
Incu-Shaker MiniPonto de referênciaE5-0014-01 
IsopropanolSigma-Aldrich190764 
Sulfato de magnésio, 7-hidratoMacron Química Fina6066-04Avantor Performance Materiais, Inc.
MetanolSigma-Aldrich179337-4LReagente ACS, > 99,8%
Espectrofotômetro NanoDrop OneThermo CientíficoND-ONEC-W 
Nitrogênio comprimidoMathesonUN1066 
Limpador de plasma de oxigênioHarrick PlasmaPDC-001-HP 
Pentaeritritol tetra(mercaptoetil) polioxietileno (4 braços-PEG)Corporação NOF AméricaPTE-100SHBrilho solar-PTE-100SH
Solução salina tamponada com fosfato (PBS), 10XSoluções para ciências da vida da VWR AmrescoK813-500MLArmazenar entre 15 °C e 30 °C
Polidimetilsiloxano (PDMS) Slygard 184Dow Corning4019862 
Polígono400MightexDSI-D-000 
Lâminas de microscópio premiumFisher Científico12-544-425 x 75 x 1 mm
Cloreto de sódioSigma Ciências da VidaS5886-500GBiorreagente, adequado para cultura de células
Hidróxido de sódioSigma-AldrichS8045-500GBioXtra, > 98%, pellets (anidro)
Fosfato de sódio monobásico di-hidratadoSigma-Aldrich71505-250GBioUltra, para biologia molecular, > 99,0% (T)
Medidor de espessura de aço inoxidávelProdutos de marca de precisão77739 
Ácido sulfúricoSigma-Aldrich320501-2.5L 
Tolueno, anidro, 99,8%Sigma-Aldrich244511-1LAnidro, > 99,8%
Tricloro (1H, 1H, 2H, 2H perfluorooctil) silano (TPS), 97%Sigma-AldrichRolamento 448931-10G 
Caldo de soja trípticoSigma-Aldrich22092-500GPara microbiologia
Sônico ultrassônicoFischer ScientificFS-110H 

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