Precipitação de calcita induzida microbiologicamente por Sporosarcina pasteurii

Resumo

Fonte: Bhaduri, S., et al., Precipitação de calcita induzida microbiologicamente mediada por Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)

Este vídeo demonstra o método de enriquecimento de Sporosarcina pasteurii com uréia e cloreto de cálcio para desencadear a atividade da urease, levando à formação de cristais de calcita visíveis por meio da precipitação de calcita induzida microbiologicamente, ou MICP.

Protocolo

1. Protocolo para Enriquecimento de Nutrientes para Acelerar a Precipitação

1. Transferir 9 ml do líquido de cultura preparado (células + meio) para vários tubos de centrifugação esterilizados, cada um com um volume de 10 ml.
2. Preparar uma solução-mãe de 100 ml do enriquecimento externo, constituída por quatro componentes nas seguintes concentrações em meio fresco: Ureia: 2 g/l, Cloreto de amónio: 1 g/L, Bicarbonato de sódio: 212 mg/l, Cloreto de cálcio: 280 mg/l. Medir cuidadosamente todos os ingredientes com uma balança analítica e misturar tudo, excepto a ureia, com meio fresco num copo e colocar no autoclave (121 °C, 15 psi, 15 min).
   1. Após a autoclave, misture a quantidade necessária de ureia (2 mg) com 1 ml de meio fresco e passe por uma seringa equipada com um filtro de seringa de 0,22 μm para completar o processo de enriquecimento.
   2. Adicionar 1 ml deste meio de enriquecimento com aditivos aos tubos de centrifugação esterilizados contendo 9 ml do líquido de cultura preparado (células + meio).
      NOTA: A ureia, sendo degradável em temperaturas elevadas, não pode ser esterilizada em autoclave. Assim, após os outros componentes terem sido autoclavados (121 °C, 15 psi, 15 min), a ureia é adicionada por último através de um filtro de seringa de 0,22 μm.
3. Vortex cada tubo completamente usando um vórtice mecânico. Colocar os líquidos enriquecidos (células + meio + aditivos) numa incubadora sem agitação a 30 °C. Controlar regularmente todas as unidades para o início da precipitação. Usando um microscópio óptico, inicie as observações microscópicas assim que o início da precipitação for detectado a olho nu. Isso geralmente ocorre entre 30 e 36 horas após o início dos experimentos.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Balões de pirex	Fisher Científico	S63268	Corning Erlenmeyer
Cilindro de medição	Cole-Parmer	CP08559GC	Cilindro Graduado Classe A da Cole-Parmer com Certificado Cal, TC; 1000 mL, 1 / Pk
Balança analítica	OHAUS	AX124E	Sendo usado para medir o peso dos reagentes
Autoclave	Brinkmann	58619000
Fita de autoclave	VWR	52428864
Folha de alumínio	Sigma-Aldrich	Z185140	Sendo usado para selar o frasco antes de colocá-lo em autoclave
Estoque bacteriano	Cedro	11859	Estoque de -80 ° C de S. pasteurii, ATCC No. é mencionado contra Cat. Não.
Pipetadores mecânicos monocanal Mline, volume variável	Biohit	725010	Comercializado pela VWR sob o número de catálogo 14005976
Ponta de micropipeta	Fisher Científico	Rolamento 212772B	Usado para arranhar placas de ágar
Incubadora	Fichário	80079098	Incubadora de Microbiologia, Série BF
Incubadora de agitação	VWR	14004300	Incubadoras de agitação de bancada VWR Signature
Parafilme	Sigma-Aldrich	Pág. 7793	Sendo usado para selar placas de ágar
Ureia	Sigma-Aldrich	U1250	Enriquecimento para meio nutriente
Bicarbonato de sódio	Sigma-Aldrich	S8875	Enriquecimento para meio nutriente
Cloreto de cálcio	Sigma-Aldrich	C1016	Enriquecimento para meio nutriente