Preparação de inóculo de Escherichia coli enterohemorrágica bioluminescente

Resumo

Fonte: Kuo, C., et al. Detecção de colonização entero-hemorrágica por Escherichia coli em hospedeiro murino por sistema de bioluminescência in vivo não invasivo. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra a preparação de uma suspensão de Escherichia coli entero-hemorrágica que expressa luciferase a partir de estoque congelado para uso como inóculo oral em modelos animais. Isso permite o rastreamento bioluminescente em tempo real da colonização intestinal durante estudos de infecção in vivo.

Protocolo

1. Preparação de bactérias EHEC ( Escherichia coli enterohemorrágica) bioluminescente para inoculação oral

NOTA: O fluxograma da linha do tempo dos procedimentos experimentais para preparação de EHEC e gavagem oral em camundongos é apresentado na Figura 1 para auxiliar na preparação experimental.

1. Streak E. coli O157:H7 EDL933 bactéria que abriga o plasmídeo luciferase em uma placa de ágar LB (Luria-Bertani) com 50 μg/mL de canamicina de estoque de -80 °C. Cultive as bactérias por 16 a 18 h a 37 °C.
2. Escolha uma única colônia da placa noturna e cultive em meio LB de 3 mL com 50 μg / mL de canamicina por 16 a 18 h em um....

Resultados

Figura 1: Linha do tempo do fluxograma de preparação experimental.

Visão geral do tempo necessário para preparar bactérias EHEC bioluminescentes e pré-tratar camundongos com estreptomicina. (A) Preparação do EHEC. (B) Preparação de camundongos.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Incubadora Shaker	SIM, DER	LM-570R	incubação de bactérias
Incubadora com agitação orbital	PRIMEIRO JOGO	S300	incubação de bactérias
Glicerol	SIGMA	G5516-1L	uso para a solução de armazenamento das bactérias
Cloreto de sódio	Sigma	31434-5KG-R	produto químico para fazer meio LB, 10 g/L
Triptona	CONDA pronadisa	Gato 1612.00	produto químico para fazer meio LB, 10 g/L
Extrato de levedura em pó	Affymetrix	23547-1 QUILOGRAMA	produto químico para fazer meio LB, 5 g/L
Ágar	CONDA pronadisa	Gato 1802.00	produto químico para fazer ágar LB
Canamicina	Sigma	K4000-5G	antibióticos, uso para seleciton
Estreptomicina	Sigma	S6501-100G	antibióticos, eliminam a microbiota em camundongos
Centrífuga de alta velocidade	Beckman Coulter	Avanti, J-26S XP	Uso para centrifugação de bactérias
Rotor de ângulo fixo	Beckman Coulter	JA25.5	Uso para centrifugação de bactérias
Rotor de ângulo fixo	Beckman Coulter	JLA10.5	Uso para centrifugação de bactérias
Garrafas de centrífuga	Beckman Coulter	REF357003	Uso para centrifugação de bactérias
Garrafas de centrífuga	Thermo Fisher científico	3141-0500	Uso para centrifugação de bactérias
Biofotômetro Eppendorf plus	Eppendorf	AG 22331 hamburgo	para medir o valor OD600 de bactérias