Cultura de células únicas de bactérias em vesículas gigantes

Resumo

Fonte: Morita, M., et al. Cultura de células bacterianas no nível de célula única dentro de vesículas gigantes. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra um método para cultivar e observar células bacterianas individuais encapsuladas dentro de vesículas gigantes ancoradas a uma bicamada lipídica suportada. O sistema permite imagens estáveis e de longo prazo da dinâmica de crescimento de uma única célula em um microambiente confinado e fisiologicamente relevante.

Protocolo

1. Preparação de um Sistema de Observação de Vesícula Gigante (GV) (Sistema de Cultura de Células Bacterianas)

1. Preparação de pequenas vesículas (SVs) para a construção de uma membrana de bicamada suportada
   1. Despeje 20 μL da solução de POPC (1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina) e 4 μL da solução de biotina-PEG-DSPE (1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[biotinil(polietilenoglicol)-2000) em um tubo de vidro.
   2. Evaporar o solvente orgânico por fluxo de ar para formar uma película lipídica e colocar esta amostra num exsicador durante 1 h para evaporar completamente o solvente orgânico....

Resultados

Figura 1: O sistema de observação da cultura de células bacterianas dentro de GVs. (a) Os GVs são imobilizados em uma membrana suportada por meio da ligação biotina-neutravidina na lamínula. Os GVs são incubados por um siste.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Bactotriptona	BD Biociências	211705
Clorofórmio	Wako Pure Chemicals	032-21921
Vidro de cobertura (18 × 18 mm)	Matsunami Glass Ind.	C018181	espessura 0,13–0,17 mm
Vidro de cobertura (30 × 40 mm)	Matsunami Glass Ind.	Ordem personalizada	espessura 0,25–0,35 mm
Centrífuga de mesa	Fornecedor:Hi-Tech Co.	ATT101	tipo de rotor de giro
Vedação dupla face (10 × 10 × 1 mm)	Nitoms	T4613
Glicose	Wako Pure Chemicals	049-31165
Microscópio invertido	Olimpo	IX-73
Metanol	Wako Pure Chemicals	133-16771
Sistema de estágio de aquecimento microscópico	TOKAI HIT	TP-110R-100
Óleo mineral	Nacalai Tesque	23334-85
Neutravidina	Thermo Fisher Científico	31000
Lente objetiva	Olimpo	LUCPLFLN 40×/0.6 NA
Membranas de policarbonato	Lipídios Polares Avanti	610005
Câmera sCMOS	Andor	Zyla 4.2 plus	Tamanho do poro 100 nm
Cloreto de sódio	Wako Pure Chemicals	191-01665
Sacarose	Wako Pure Chemicals	196-00015
Banho ultrassônico	COMO UM	ASU-3D
Extrato de levedura	BD Biociências	212750
Tubo de plástico com tampa de 0,6 mL	Watson	130-806C
Tubo de plástico com tampa de 1,5 mL	Sumitomo Baquelite Co.	MS4265-M
1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina	Lipídios Polares Avanti	850457P
1,2-distearoil-nglicero-3-fosfoetanolamina-N-[biotinil(polietilenoglicol)-2000]	Lipídios Polares Avanti	880129P	POPC
			Biotina-PEG-DSPE