Um ensaio multipoço à base de líquido para triagem de knockdowns de C. elegans

Abstract

Fonte: Anderson, Q. L. et al. Um patossistema de C. elegans de alto rendimento, alto conteúdo e base líquida. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra um método de triagem de alto rendimento usando Caenorhabditis elegans para estudar knockdowns de genes durante interações patógeno-hospedeiro. Ele descreve o procedimento para preparar vermes knockdown e transferi-los para placas de ensaio para avaliar os efeitos da morte de vermes induzida por patógenos.

Protocol

1. Adaptação para triagem de várias cepas ou knockdowns de Caenorhabditis elegans (configuração da tela de interferência de ácido ribonucleico (RNAi))

Nota: Esta é uma tela de RNAi descrita para uma configuração de placa de 24 poços.

1. Adicione 1 mL de S Basal por poço de uma placa de 24 poços contendo vermes semeados com RNAi. Agite suavemente os vermes agitando a placa e, em seguida, transfira-os para uma placa vazia e estéril de 24 poços profundos. Permita que os vermes se estabeleçam gravitacionalmente (~ 5 minutos).
2. Aspire o sobrenadante, deixando aproximadamente 1 mL. Adicione 7 mL de S Basal a cada poço.
3. Repita as etapas 1.1 a 1.2 no mínimo mais 2 vezes. Após a lavagem final, aspirar sobrenadante, deixando aproximadamente 400 μL.
4. Usando a função Reamostrador do classificador de minhocas, classifique 22 minhocas da suspensão de sem-fim de placa de 24 poços em cada poço de uma placa de 384 poços (cada poço de uma placa de 24 poços produz de 8 a 12 poços de uma placa de 384 poços).
   1. Para evitar a fome, pipete as bactérias em placas de 384 poços (uma cepa que serve apenas como alimento, como OP50, ou uma cepa patogênica) antes da classificação.
5. Depois que os vermes forem classificados na placa de 384 poços, adicione pequenas moléculas ou outros materiais específicos do experimento.

Materials