Visualização da motilidade bacteriana usando meio semissólido suplementado com corante redox

Resumo

Fonte: Chu, W., e Zhuang, X. Visualizando a motilidade bacteriana com base em uma reação de cor. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra um ensaio de ágar semissólido à base de corante redox para avaliar a motilidade bacteriana distinguindo visualmente cepas móveis e não móveis.

Protocolo

Cepas bacterianas

NOTA: Oitenta cepas foram isoladas do ambiente aquático e identificadas usando um instrumento automatizado de identificação de bactérias (ver Tabela de Materiais), incluindo Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae e Aeromonas hydrophila (Tabela 1). Staphylococcus aureus (ver Tabela de Materiais) foi usado como controle imóvel negativo; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella typhimurium (ver Tabela de Materiais) foram usadas como cepas de controle positivo.

1. Identifique as cepas bacterianas de teste a serem usadas para análise de motilidade.
2. Incluir controles imóveis negativos e cepas de controle positivo móveis.

Observação da motilidade bacteriana aprimorada por TTC

1. Colher colónias isoladas de bactérias de ensaio de placas de ágar e inoculá-las no meio semi-sólido com TTC (cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio), perfurando-as com agulhas de inoculação.
2. Cultive os tubos a 37 °C na incubadora por 24-48 h para observar os resultados.
3. Observe o estado de crescimento: caracterize a bactéria como imóvel (-) se apenas a linha de punção for vermelha. Caracterize a bactéria como móvel (+) se a cor vermelha se espalhar levemente para fora ao longo da linha de punção.

Tabela 1: Comparação da motilidade bacteriana.

Coar		Meio semissólido com ágar 0,4%		Meio semissólido com ágar 0,4% e TTC 0,005%
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Os números indicam o número de cepas positivas (+) e negativas (-).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ágar Bacto	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	Controle positivo
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Controle positivo
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	Controle imóvel negativo
Triptose	OXÓIDE
TTC (cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazólio)	Sigma	298-96-4
Sistema automatizado de identificação microbiana VITEK 2	Bio Mérieux