Padronização microfluídica e rastreamento baseado em fluorescência do crescimento bacteriano de célula única

Abstract

Fonte: Pioli, R., et al., Padronização de microrganismos e micropartículas por meio de montagem assistida por capilaridade sequencial. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra o método de captura de células únicas de Escherichia coli (E. coli) marcadas com fluorescência em armadilhas microfluídicas usando uma suspensão livre de carbono e fluxo controlado, seguido de adição de nutrientes para desencadear o crescimento e a imagem de fluorescência de microcolônias.

Protocol

1. Padrão bacteriano

1. Um dia antes do experimento, aumente uma população de Escherichia coli (cepa MG1655 prpsM-GFP). Inocular a cultura directamente do material congelado e crescer durante a noite durante 20 h em meio de caldo de lisogenia (LB) numa incubadora agitadora a 37 °C. Adicionar 50 μg/ml de canamicina para que as células retenham o plasmídeo prpsM-GFP (proteína fluorescente verde).
2. No dia do experimento, ajuste a incubadora de caixas (Figura 1A) a 37 ° C várias horas antes do experimento para garantir uma temperatura uniforme e estável antes de começar. Em seguida, coloque a bomba de seringa e a placa de vidro aquecida ....

Results

Figura 1: Esquema da plataforma para montagem assistida por capilaridade sequencial em um canal microfluídico. (A) Incubadora de caixas. A incubadora de caixas mantém uma temperatura uniforme e constante (aqui, 30 °C) dentro do canal microfl.......

Materials