Preparação de cultura de Salmonella typhimurium

Resumo

Fonte: Gutiérrez, S., et. al., Isolamento de fagossomos contendo Salmonella typhimurium de macrófagos. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra a cultura e preparação de Salmonella typhimurium para obter uma suspensão bacteriana limpa e metabolicamente ativa, adequada para uso experimental.

Protocolo

Todas as etapas que envolvem o uso de Salmonella typhimurium patogênica devem ser realizadas em uma instalação BSL-2 (Nível de Biossegurança 2) ou nível de segurança biológica superior.

1. Cultura de Salmonella typhimurium

1. Inocule Salmonella typhimurium (cepa SL1344) de uma única colônia bacteriana em 5 mL de caldo de infusão cérebro-coração (BHI) usando uma alça bacteriana.
2. Incubar a suspensão bacteriana numa incubadora a 37 °C durante a noite, agitando-a.
3. No dia seguinte, transferir 1 ml da suspensão bacteriana para 19 ml de caldo BHI num balão cónico e incubar a 37 °C numa estufa com agitação.
4. Monitore o crescimento de S. typhimurium medindo a densidade óptica (OD) a 600 nm (OD₆₀₀) com um espectrofotômetro. As medições devem ser feitas aproximadamente a cada 30 minutos.
5. Quando o OD₆₀₀ atingir 1,0, remova a suspensão bacteriana da incubadora e transfira-a para um tubo de 50 mL. Centrifugue as bactérias a 5.400 x g por 15 min a 4 °C.
6. Remova o sobrenadante e ressuspenda em 10 mL de solução salina estéril tamponada com fosfato (PBS).
7. Centrifugue a 5.400 x g por 15 min a 4 °C.
8. Remova o sobrenadante e ressuspenda as bactérias em 4,9 mL de PBS estéril.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
MgCl₂	Carl Roth	Resposta 537.4
Sacarose	Carl Roth	4621.1
Manitol	Carl Roth	4175.1
Espectrofotômetro SmartSpec 3000	Bio-Rad	170-2501
Alça bacteriana (10μl)	Sarstedt	86.1562.010
Salmonella enterica sorovar Typhimurium SL1344	Instituto Leibniz DSMZ-Coleção alemã de microrganismos e culturas celulares
PBS (solução salina tamponada com fosfato)	Biocromo	L1825