Preparação de cultura de Streptococcus mitis para estudos de interação patógeno-hospedeiro

Resumo

Fonte: Naji, A., et al. Estudo do estresse oxidativo causado pelos estreptococos do grupo Mitis em Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra o método de cultivo de Streptococcus mitis em condições microaerofílicas usando extrato de levedura Todd-Hewitt, ou meio de ágar THAH, para preparar culturas bacterianas para estudos de interação patógeno-hospedeiro.

Protocolo

1. Preparação de estreptococos do grupo Mitis para infecção

1. Risque as cepas desejadas de estreptococos no ágar 100 mm x 15 mm THY (extrato de levedura Todd-Hewitt) (se as placas foram armazenadas a 4 ° C, pré-aqueça as placas a 37 ° C antes de listrar as respectivas cepas) e, em seguida, incube as placas a 37 ° C durante a noite (~ 18 h) em um frasco de vela, proporcionando um ambiente microaerofílico para o crescimento dos estreptococos (as placas listradas podem ser armazenadas por uma semana a 4 ° C).
2. Para propagar isolados clínicos de estreptococos, use ágar sangue de soja tríptico. Incube as placas a 37 °C em um frasco de vela durante a noite (~ 18 h).
3. No dia seguinte, remova os pratos do frasco de velas e escolha as colônias isoladas usando um laço estéril. Inocule tubos cônicos estéreis de 15 mL contendo 2 mL de caldo THY. Para propagar isolados clínicos de estreptococos, suplemente o caldo THY com 5% v/v de sangue de ovelha. Feche bem as tampas e incube os tubos a 37 °C em condições estáticas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Caldo BD Bacto Todd Hewitt	Fisher Científico	DF0492-17-6
Extrato de levedura	Fisher Científico	BP1422-500
Pipetas Sorológicas de Poliestireno Descartáveis 10 mL	Fisher Científico	07-200-574
Pipetas sorológicas descartáveis de poliestireno 25 mL	Fisher Científico	07-200-575
Placas de Petri Bacteriológicas Falcon com Tampa (35 mm x 10 mm)	Fisher Científico	08-757-100A
Placa de Petri com tampa transparente (60 mm x 15 mm)	Fisher Científico	FB0875713A
Placas de Petri com tampa transparente (100 mm x 15 mm)	Fisher Científico	FB0875712
S. mitis ATCC 49456
Ágar