Motilidade deslizante em filamentos de Phormidium lacuna

Resumo

Fonte: Weber, N., et al., Transformação Natural, Expressão de Proteínas e Crioconservação da Cianobactéria Filamentosa Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra o procedimento para avaliar a motilidade deslizante em Phormidium lacuna , homogeneizando culturas de filamentos para criar uma suspensão uniforme, preparando uma configuração de ensaio de placa de Petri sobre uma lâmina de microscópio e visualizando o movimento do filamento.

Protocolo

1. Ensaio para movimento em meio líquido
   1. Para observação direta da motilidade, transferir 8 mL de meio contendo P. lacuna para uma placa de Petri de 6 cm. Aguarde alguns minutos até que a amostra atinja a temperatura ambiente e, em seguida, cubra a placa de Petri com papel celofane.
   2. Coloque uma lâmina de microscópio na mesa xy de um microscópio padrão com uma câmera. Ligue a luz do microscópio. O ideal é sempre usar as mesmas configurações elétricas e ópticas para a iluminação. Mova uma objetiva de 4x ou 10x para o caminho da luz.
   3. Coloque a placa de Petri em cima da lâmina. Ajuste filamentos individuais ou feixes de filamentos pelos movimentos x, y e z da mesa.
      NOTA: Devido ao arranjo tridimensional, apenas uma parte da seção relevante pode estar em foco. A folha de celofane permite ajustar o foco sem restrições.
   4. Observe os movimentos de filamentos ou feixes individuais. Certifique-se de que a lente objetiva não toque no líquido. Registre os movimentos dos filamentos com uma câmera de microscópio padrão.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Artigos de vidro diferentes
Microscópio DM750	Zeiss
Câmera ocular MikrOkular Full HD	Bresser		para gravações de lapso de tempo, acoplado ao minicomputador Raspberry Pi
Poliestirol de placas de Petri, 60 mm x 15 mm	Merck	Pág. P5481-500EA
Software, URL
ImagemJ		Software para processamento de imagens (intensidades de pixels, diâmetro do círculo)
Meios de cultura
Água do mar artificial	0,41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl, 2,4 mM NaHCO₃, 0,84 mM KBr, 0,49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 - meio líquido	água do mar artificial, solução de oligoelementos a 0,1% (v/v), solução vitamínica a 0,05% (v/v), NaNO₃ 0,88 mM, NaH₂PO₄ 36 μM
Solução de oligoelementos	0,36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄, 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0,91 μM MnCl₂
Solução vitamínica	0,3 μM de tiamina-HCl, 2,1 nM de biotina, 0,37 nM de cianocobalamina