Preparação de uma cultura anaeróbica de lodo em condições livres de oxigênio

Resumo

Fonte: Wagner, A. O., et al., Preparação Média para o Cultivo de Microrganismos em Condições Estritamente Anaeróbicas/Anóxicas. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra a preparação e inoculação de culturas anaeróbicas usando lodo livre de oxigênio sob condições estritamente controladas e desoxigenadas.

Protocolo

Inoculação do meio

1. Preparar o inóculo a partir do digestor anaeróbico.
   1. Adicione 400 mL de água destilada a um frasco e leve para ferver.
   2. Arrefecê-lo (< 30 °C) enquanto lava permanentemente o headspace com N₂.
   3. Adicione aproximadamente 100 g de lodo derivado de um digestor anaeróbico.
      NOTA: Evite o contato excessivo do lodo com o oxigênio.
   4. Registar a massa exacta das lamas adicionadas para a determinação exacta da diluição.
   5. Trocar o headspace do balão por N₂ e fechá-lo com um septo de borracha butílica.
   6. Agitar o balão durante 30 minutos a 120 rpm.
2. Remova 5 mL de inóculo usando uma seringa + cânula e injete-o nos frascos de soro preparados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Frascos de cultura (120 mL, N20)	Ochs, Alemanha	102046
Septos de borracha butílica (N20)	Ochs, Alemanha	102049
Tampas de alumínio (N20)	Ochs, Alemanha	102050
Gás N₂	Messer, Áustria		Pureza 5.0
Seringas + cânulas	vário
Frisador	Ochs, Alemanha	102051
Descrimpador	Ochs, Alemanha	102052
GC2010	Shimadzu