Análises histológicas e hematológicas para avaliar os efeitos do Bacillus subtilis em ratos sob estresse térmico

Resumo

Fonte: Sorokulova, I., et al. Prevenção dos Efeitos Adversos ao Estresse Térmico em Ratos pela Cepa Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

Este vídeo apresenta análises histológicas e de microscopia hematológica usadas para avaliar os efeitos protetores do Bacillus subtilis em ratos expostos ao estresse térmico.

Protocolo

1. Análise histológica

1. Retire amostras do intestino delgado de cada rato experimental por meio de procedimento cirúrgico. Fixe amostras no Fixador de Bouin, infiltre na parafina, prepare seções de 6 μm e colora as seções com hematoxilina e eosina usando procedimentos padrão.
2. Use um sistema de microscópio de alta resolução para medir a altura das vilosidades intestinais e a espessura total da mucosa em cada amostra (ampliação 100X). Analise 4 amostras de cada rato e faça pelo menos vinte medições em cada amostra. Resultados expressos em micrômetros.

2. Microscopia Óptica de Alta Resolução do Sangue

1. Use uma plataforma de isolamento de vibração como base para o sistema de microscópio e para a câmera de vídeo e o computador para gravar as imagens ao vivo. Calibre imagens de teste usando um slide Richardson.
2. Coloque 7 μl de sangue recém-coletado de cada rato em uma lâmina de vidro, capa de cobertura, fotografe e registre dez quadros de imagem de 72 × 53,3^μm2 em cada amostra (ampliação 1.700X).
3. Meça a concentração de vesículas usando um software que fornece imagens ópticas de alta resolução e visão direta em tempo real. Examine no mínimo 20 quadros de imagem para cada condição experimental.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Soro salino tamponado com fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Fixativo de Bouin	Ciências da Microscopia Eletrônica, Hatfield, PA, EUA	15990
Slides de teste de Richardson	Ciência da Microscopia Eletrônica, Hatfield, PA, EUA	80303
Câmera de vídeo Sony DXC-33	Sony
Sistema óptico de microscópio óptico	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Software Image-Pro Plus	Cibernética de Mídia, MD, EUA