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1. Manutenção e Crescimento das Cepas de Vibrio cholerae
- Preparação e Uso de Culturas de Animais Congelados
- Pellet 1,8 mL de cultura líquida durante a noite por 2 min por centrifugação (≥8.600 x g) em um tubo estéril de microcentrífuga de 2 mL, remova o sobrenadante e resuspenda o pellet celular em 900 μL de caldo fresco Luria-Bertani (LB) por pipeta.
- Adicione 900 μL de glicerol estéril de 60% (v/v) à cultura e misture por meio de vórtice.
- Transfira a mistura para um tubo criogênico estéril de 2 mL e armazene indefinidamente a -80 °C.
- Para usar, remova uma pequena quantidade de caldo congelado usando um laço e faixa estéril de inoculação para colônias individuais em placas de ágar LB. Retorne imediatamente o caldo congelado a -80 °C após o uso para evitar que as culturas descongelem completamente. Incube as placas com a tampa para baixo por 12 a 16 horas a 37 °C.
- Crescimento de Culturas Noturnas em Meio Líquido
- Faixa para colônias individuais (conforme seção 1.1.4) de material congelado para placas de ágar LB. Incube as placas com a tampa para baixo por 12 a 16 horas a 37 °C.
- Inocule 4 mL de caldo LB líquido em um tubo de cultura estéril de 10 mL com uma única colônia, tocando a superfície da colônia única com um aplicador estéril e transferindo a colônia para o caldo líquido.
- Incubar com aeração em um incubador shaker a 225 rotações por minuto (rpm) por 12 a 16 horas a 37 °C.