Ensaio Voges-Proskauer para Diferenciação de Biótipos de Vibrio cholerae

Resumo

Fonte: Brumfield, K. D., et al., Técnicas de Laboratório Usadas para Manter e Diferenciar Biotipos de Isolados Clínicos e Ambientais de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demonstra o teste Voges-Proskauer (VP) para diferenciar entre três biótipos de Vibrio cholerae: clássico, tipo selvagem El Tor e variante El Tor. Cada cultura é inoculada em um meio contendo glicose, incubada e tratada com α-naftol e hidróxido de potássio para detectar a presença de acetoína. Uma cor rosada-avermelhada, indicando uma reação VP positiva, é observada apenas no biótipo selvagem El Tor, distinguindo-o dos tipos clássico e variante.

Protocolo

Ensaio Voges-Proskauer (VP)

1. Prepare cultura(s) durante a noite em caldo líquido LB.
2. Inocule 4 mL de caldo Voges-Proskauer vermelho de metil, ou caldo MR-VP, pipetando 10 μL de cultura previamente preparada durante a noite em caldo MR-VP de 4 mL em um tubo de cultura estéril e incube com aeração em uma incubadora agitadora a 225 rpm por 12 a 16 horas a 37 °C.
3. Adicione 150 μL de 5% (p/v) de α-naftol e 50 μL de 40% (p/v) KOH a 1 mL de alíquotas de MR-VP durante a noite em tubos de cultura estéreis, respectivamente.
4. Faça um vórtice breve e deixe em temperatura ambiente por até 4 horas até que a mudança de cor se forme.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomédicos	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189