Enriquecimento seletivo e isolamento de bactérias marinhas degradadoras de óleo a partir de amostras de água do mar

Resumo

Fonte: Villela, H. D. M. , et al. Prospectação de Cepas Microbianas para Biorremediação e Desenvolvimento de Probióticos para Pesquisa e Preservação de Metaorganismos. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra o isolamento seletivo de bactérias marinhas degradadoras do petróleo ao enriquecer amostras de água do mar em meios à base de petróleo, possibilitando a recuperação de cepas puras com potencial de aplicações na biorremediação de petróleo bruto e limpeza ambiental.

Protocolo

1. Coleta e armazenamento de água e corais para isolamento microbiano

NOTA: É essencial registrar as coordenadas e a temperatura dos locais de amostragem. Se possível, metadados como salinidade, pH, profundidade e intensidade luminosa também podem ajudar a encontrar abordagens de cultivo ajustadas e a interpretação futura dos dados. Para resultados confiáveis, mantenha as amostras armazenadas pelo menor tempo possível. Os microbiomas da água/coral podem mudar consideravelmente se as amostras não forem mantidas na temperatura adequada e/ou armazenadas por longos períodos. Se a etapa de isolamento não for realizada imediatamente após a coleta, é cruci....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Garrafa de armazenamento de mídia PYREX de 500 mL	thomas scientific/Corning	1743E20/1395-500	Usava para amostrar água.
Frascos aspiradores de 500 mL	thomas scientific/Corning	1234B28/1220-2X	Usado para separar as frações de óleo.
Alicate de corte de arame de 6 polegadas	thomas scientific/Restek	1173Y64/23033	Usado para cortar fragmentos de coral.
Ágar	Himídia	PCT0901-1KG	Usava para fazer mídia sólida.
Caldo Haas de Bushnell	Himídia	M350-500G	Usado como meio mínimo para ser complementado com fontes de carbono.
Frasco Erlenmeyer	Thomas Scientific/DWK Ciências da Vida (Kimble)	4882H35/26500-125	Usado para incubar macerados de coral com contas de vidro.
Exaustor de Fluxo Laminar			Precisava trabalhar em condições estéreis.
Luria Bertani Broth, Miller (Miller Luria Bertani Broth)	Himídia	M1245-1KG	Usado como meio rico para cultivar bactérias.
Ágar Marinho 2216 (Ágar Marinho Zobell)	Himídia	M384-500G	Usado como meio rico para cultivar bactérias.
Incubadora de Agitadores Orbitais			Usado para incubar meios líquidos e óleo.
Incubadora de Placas			Usado para incubar placas.
Almofariz e pilão de porcelana	Thomas scientific/United Scientific Supplies	1201U69/JMD150	Usado para macerar fragmentos de coral.
Centrífuga refrigerada			Usado para centrifugar culturas bacterianas.
Espectrofotômetro			Usado para medir a densidade óptica de culturas bacterianas.
Kit de Purificação de DNA Genômico Wizard	Promega	A1120	Usado para extração de DNA de cepas microbianas.