O grampo hiperinsulinêmico euglicêmico-é o "padrão ouro" para a avaliação da ação da insulina. A insulina é infundida a uma taxa constante estimulando a captação de glicose. A quantidade de glicose exógena infundido para combater essa queda é um indicativo de sensibilidade à insulina. Aqui, o procedimento é realizado em um rato, consciente desenfreada.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamp in the Rat Consciente
Neste artigo
Resumo
Resumo
Diabetes tipo 2 (diabetes tipo 2) está crescendo rapidamente na prevalência. Caracterizada por uma produção inadequada de insulina ou a incapacidade de utilizar a insulina produzida, os resultados T2D em níveis elevados de glicose no sangue. O "padrão-ouro" na avaliação da sensibilidade à insulina é um clamp hiperinsulinêmico euglicêmico-clamp ou insulina. Neste procedimento, a insulina é administrada a uma taxa constante, resultando em uma queda da glicose no sangue. Para manter a glicose no sangue a um nível constante, glicose exógena (D50) é infundida na circulação venosa. A quantidade de glucose injectada para manter a homeostase é indicativo de sensibilidade à insulina. Aqui, mostramos o procedimento de fixação básica na cronicamente cateterizada, rato, desenfreada consciente. Este modelo permite que o sangue a ser coletado com o mínimo de stress para o animal. Após a indução da anestesia, a incisão é feita na linha média e da artéria carótida comum esquerda e veia jugular direita são cateterizados. Cateteres inseridos são lavados com salina heparinizada, então exteriorizado e seguro. Animais são permitidos para se recuperar para 4-5 dias antes do experimento, com ganho de peso monitorados diariamente. Apenas os animais que recuperar o peso de pré-cirurgia níveis são utilizados em experiências. No dia do experimento, os ratos estejam em jejum e conectado a bombas contendo insulina e D50. Glucose linha de base é avaliada a partir da linha arterial e usou uma referência durante todo o experimento (euglicemia). Depois disso, a insulina é administrada a uma taxa constante para a circulação venosa. Para combinar com a queda da glicose no sangue, D50 é infundida. Se a taxa de infusão D50 é maior do que a taxa de absorção, um aumento da glicose irá ocorrer. Da mesma forma, se a taxa é insuficiente para atender a absorção de glicose do corpo inteiro, uma queda irá ocorrer. Titulação de glicose continua até que as leituras de glicose estáveis são alcançados. Os níveis de glicose e as taxas de infusão de glicose durante este período estável são registrados e relatados. Resultados fornecem um índice de sensibilidade de todo o corpo à insulina. A técnica pode ser refinada para atender às necessidades específicas experimental. Ela é reforçada pelo uso de traçadores radioativos que podem determinar tecidos específicos de insulina estimulou a captação de glicose, bem como volume de negócios de glicose do corpo inteiro.
Protocolo
A: Cateterismo Cirúrgica da circulação arterial e venosa
Parte 1: arterial e venoso Preparação Cateter
- Cortar 15 cm de PE-50 (diâmetro interno de 0,58 milímetros (0,023 ") x um diâmetro exterior de 0,965 milímetros (0,038"). Corte uma seção de tubo de silastic um milímetro (0,76 mm (0,030 ") de diâmetro interno x 1,65 milímetros (0,065 ") de diâmetro externo) para uso como restrição do grânulo. O talão de restrição impede o rato de retirar o cateter, uma vez que está no lugar.
- Inserir as pontas dos micro pinças de dissecação para o lúmen do talão de restrição e gentilmente segure as pontas das pinças para além de esticar....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Inicialmente desenvolvido para a investigação da sensibilidade à insulina em seres humanos, o procedimento de fixação foi agora adaptada para outras espécies, incluindo ratos de laboratório e camundongos. Modelos animais de resistência à insulina investigando fornece uma ajuda significativa para a compreensão da fisiopatologia da sensibilidade à insulina e patologias associadas, bem como identificar as intervenções terapêuticas que têm valor clínico 1,2. Vários métodos para avaliar a sensibilidade à insulina .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Procedimentos foram aprovados pela Universidade de Calgary e Animal Care Use Comitê e respeitar a Associação Canadense de orientações Laboratory Animal Science for experimentação. Os autores não têm interesses conflitantes ou divulgações.
Agradecimentos
Este estudo foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde e Canada.JS Genoma detém concessões salariais apoio da Foundationfor Heritage Alberta Pesquisa Médica, Heart and Stroke Foundation do Canadá e da Associação de Diabetes do Canadá. Um agradecimento especial ao Dr. David Wasserman e Bracy Bingle para ensinar este procedimento para o laboratório Shearer.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários (opcional) |
| Tubos de polietileno Intramedic (PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | Diâmetro interno de 0,58 milímetros (0,023 ") x diâmetro externo de 0,965 milímetros (0,038") |
| Dow Corning Tubing Laboratório Silastic | Fisher Scientific | 11-189-15C | Diâmetro interno de 0,76 milímetros (0,030 ") x diâmetro externo de 1,65 milímetros (0,065") |
| Tygon S-50-HL Tubulação de Medicina | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Diâmetro interno de 3.2mm (0.125 ") x 4,7 milímetros de diâmetro exterior de (0,1875") |
| Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel de Controle |
| Lâmina cirúrgica estéril | VWR | BD371610 | |
| Micro Pinça curva Dissecting | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Micro Pinça reta Dissecting | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Hemostática curva | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Hemostática reta | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Dica Guarda hemostat | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Tesoura reta Cirurgia | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter | Terumo Medical Products | 810127A | 21 gauge, 1 pol |
| Introdutor do cateter estéril | Becton Dickinson | 406999 | |
| 14-gauge agulha Blunt | Becton Dickinson | 511310 | Calibre 14, 2 pol |
| Sutura cirúrgica estéril | Johnson & Johnson Medical Products | 1679H | Seda, tamanho 3-0 |
| Não-esterilizadas suturas cirúrgicas | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | Seda, tamanho 4-0 |
| Cotonetes de algodão | VWR | 10806-005 | |
| 4ply compressas de gaze | VWR | CA43845-062 | |
| Pequenos animais Clippers sem fio | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurano | Halocarbon Products Corp | IPN-45 | |
| Anestésico Carrinho | Benson Medical Industries, Inc. | ||
| Etanol 70% | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine solução anti-séptica | Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. | 105267 | |
| Modelo 11 Plus bomba de seringa | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Tubos de aço inox Engates | Harvard Apparatus | 72-4434 | 23 gauge, 0,3 polegadas |
| Tubulação de aço inoxidável Plugs | Harvard Apparatus | 72-4436 | 23 gauge, 0,5 pol |
| Stainless Steel Needles Blunt | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | Calibre 22 |
| 60 Grau Y-Conectores | Peças pequenas | STCY-22-05 | Calibre 22 |
| CritSpin Centrífuga Micro-hematócrito | Iris processamento das amostras | CS12 | |
| Mini Centrífuga | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Micro Tubos da centrífuga | VWR | 53550-778 | |
| 50ml centrifugar tubos de polipropileno | VWR | 89004-364 | |
| Dica 1ml Seringas de plástico deslizamento | Becton Dickinson | 309602 | |
| Seringas 3ml Dica plástico Luerlok | Becton Dickinson | 309585 | |
| Injeção de anticoagulante heparina | Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. | 102824 | Fabricante: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI |
| Solução EDTA | Promega Corp | V4231 | 0,5 M, pH 8,0 |
| Salina | Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. | ABB7983154 | Fabricante: Hospira Cloreto de Sódio 0,9% |
| Dextrose 50% | Vetoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| 1ml seringas de insulina | Becton Dickinson | 309311 | |
| Fisherbrand Selante * Hemato-Seal | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand * Tubos capilares de microhematócrito | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| One Touch Ultra tiras de teste | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch Ultra medidor de glicose do sangue | LifeScan, Inc. | AW 085-314.oB | |
| Sódio Pentobarbitol | Ceva Sante Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Red Tape Labeling Laboratório | VWR | 89097-932 | |
| Fita azul Etiquetagem de Laboratório | VWR | 89097-936 | |
| Pesar Escala | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vórtice | VWR | 58815-234 | |
| Cronômetro | VWR | 62344-641 |
Referências
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
