Visualização da Infecção do Trato Urinário em um modelo de camundongo usando bioluminescência

Abstract

Fonte: Luyts, N., et al. Acompanhamento longitudinal de infecções do trato urinário e seu tratamento em camundongos usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2021).

Este vídeo demonstra a indução e o rastreamento da infecção do trato urinário em um modelo camundongo usando E. coli bioluminescente injetada na bexiga, onde ocorrem adesão, invasão bacteriana e replicação intracelular. A luz emitida pelo operon bioluminescente serve como marcador em tempo real da carga bacteriana durante a progressão da infecção.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Inoculação dos animais

1. Preparação dos animais
   1. Escolha a(s) cepa(s) de camundongo desejada(s) dependendo da pergunta de pesquisa e da disponibilidade de linhas de eliminação, detalhes experimentais e diferenças na suscetibilidade às ITUs. Lembre-se que a cateterização transuretral é mais fácil em camundongos fêmeas. Não use animais com menos de 8 semanas, pois são imunologicamente imaturos. Aqui, foram usadas fêmeas de camundongos C57Bl/6J de 12 semanas.
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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Vaporizador de anestesia	Aparato de Harvard Limitado	N/A	https://www.harvardapparatus.com/harvard-apparatus-anesthetic-vaporizers.html
Baytril 100 mg/mL	Bayer	N/A	Enrofloxacina
BD Insyte Autoguard 24 GA	BD	382912	Angiocateter amarelo, use ponta plástica estéril para a instalação
Mouses C57Bl/6J	Janvier	N/A
Centrífuga 5804R	Eppendorf	EP022628146
Dropsense 16	Laboratórios Desencadeados	Tríneo	para medir OD 600nm
Soro Tamponado de Fosfato da Dulbecco, Gibco	ThermoFisher Scientific	REF 14040-083
Etanol 70% desnaturado 5L	VWR internacional	85825360
Falcon 14ml Tubo de Poliestireno com Fundo Redondo, Snap-Cap	Corning	352057
Falcon 50ml cellstart	Greiner	227285
Seringa Hamilton GASTIGHT, PTFE Luer lock, 100 μL	Sigma-Aldrich	26203	para garantir uma instilação bacteriana lenta de 50 μL
Anilha de inoculação	Roth	6174.1	portador: Art. Nº 6189.1
Iso-Vet 1000mg/g	Produtos Dechra Veterinary	N/A	Isoflurano
Sistema de Imagem In Vivo do Espectro IVIS	PerkinElmer	REF 124262	Dispositivo de imagem