Patogênese Bacteriana e Interações com o Hospedeiro

Fonte: Jung, A. L., et al. Vesículas da membrana externa da Legionella pneumophila : Isolamento e análise de seu potencial pró-inflamatório em macrófagos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o isolamento das vesículas de membrana externa (OMVs) da Legionella pneumophila usando centrifugação sequencial, filtração estéril e ultracentrifugação. Os OMVs purificados, enriquecidos em proteínas de membrana e lipopolissacarídeos, são adequados para estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Comece com tubos contendo o estágio persistente não replicante, ou NRP, de Mycobacterium tuberculosis, que possui uma camada externa espessada.Adicione esferas de vidro a um tubo e agite-o para desestabilizar mecanicamente a camada externa das micobactérias, aumentando a permeabilidade.Em seguida, transfira a suspensão micobacteriana batida pela esfera para um tubo novo.Adicione rifampicina marcada fluorescente, um antibiótico antituberculose, tanto às suspensões celulares não tratadas quanto...

Comece com uma suspensão de E, patogênico aviário. coli ou APEC em meio de cultivo.A APEC é uma bactéria Gram-negativa que infecta aves ao entrar pelo trato respiratório.Após romper a camada mucosa, as APEC aderem às células epiteliais, multiplicam-se localmente e rompem a barreira epitelial para entrar na corrente sanguínea. A bactéria então se espalha para vários órgãos, causando infecção sistêmica.Adicione um volume igual da suspensão bacteriana a cada poço de uma placa multipoço contendo...

Fonte: Spiesz, E. M., et al., Padronização Tridimensional de Biofilmes Engenheirados com uma Bioimpressora Faça-você-mesmo. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um método para comparar padrões de alginato impressos em 3D contendo cepas bacterianas controle ou geneticamente modificadas. A cepa de teste produz fibras de curli na indução, que reforçam a estrutura do hidrogel de alginato. Após o tratamento com solução quelante de cálcio, apenas o padrão de teste permanece intacto, destacando o...

Fonte: Tay, S. B., et al. Perturbação Antivirulenta de Biofilmes Patogênicos usando lactonases modificadas para apagamento do quórum. J. Vis. Exp. (2016)O vídeo demonstra um método para quantificar a biomassa de biofilme em uma bactéria patogênica, comparando controles não tratados com amostras tratadas com uma enzima que apaga quórum. A enzima interrompe a sinalização bacteriana durante a incubação inicial, reduzindo a adesão celular. Após lavagem e incubação adicional, poços de controle...

Fonte: Schlafer, S, e Frost Kristensen, M. Monitorando o pH Extracelular em Biofilmes Cruzados do Reino usando Microscopia Confocal. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o cultivo de biofilmes cruzados entre Streptococcus mutans e Candida albicans sob condições semelhantes às orais para modelar interações bactéria-fúngico, possibilitando o estudo da sinergia microbiana, adesão mediada pelo glucano e virulência acidogênica na patogênese oral.

Fonte: Kurz, D. L., et al. Plataforma microfluídica para estudar bioentupimento em meios porosos. J. Vis. Exp. (2022)O vídeo demonstra o uso de um dispositivo microfluídico para estudar a formação de biofilmes. Uma suspensão bacteriana é introduzida no microcanal, seguida de incubação para permitir o desenvolvimento do biofilme. O fluxo é então retomado, e o monitoramento de pressão junto com imagens é usado para detectar formação de biofilme e obstrução dos poros ao longo do tempo.

Fonte: Perinbam, K., e Siryaporn, A. Um ensaio rápido de virulência bacteriana baseado em imagem usando ameba. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um método rápido baseado em imagens para avaliar a virulência bacteriana, incubando amebas com bactérias presas à superfície ou planctônicas, aplicando uma pastilha de agarose de calceína-acetoximetil (calceína-AM) e imagens de fluorescência para detectar danos à célula hospedeira.

Fonte: Bucher, T., et al. Metodologias para Estudo de Biofilmes de B. subtilis como modelo para caracterização de inibidores de biofilmes de pequenas moléculas. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra um ensaio de formação de película usando Bacillus subtilis para avaliar inibidores de pequenas moléculas que interrompem a síntese de matriz e o desenvolvimento de biofilmes, fornecendo um modelo para triagem de compostos que inibem seletivamente o crescimento associado à superfície sem afetar...

Fonte: Bucher, T., et al. Metodologias para Estudo de Biofilmes de B. subtilis como modelo para caracterização de inibidores de biofilmes de pequenas moléculas. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demonstra como a integridade da matriz de biofilmes influencia a resistência bacteriana ao etanol, comparando unidades formadoras de colônias em biofilmes não tratados e com inibidores interrompidos. A redução das UFCs em amostras tratadas com inibidores demonstra que a matriz extracelular é essencial para...

Fonte: Beaudoin, T., et al. Visualizando os efeitos do escarro no desenvolvimento de biofilme usando um modelo de vidro coberto com câmara. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o uso de um coverglass com câmara para estudar o efeito dos fatores do hospedeiro do escarro derivados do paciente com fibrose cística no desenvolvimento de biofilme bacteriano.

Comece com uma suspensão bacteriana em meio nutritivo.Adicione a suspensão a uma placa multipoço e incube.Os nutrientes presentes no meio facilitam o crescimento e a ligação bacteriana.As bactérias aderidas secretam substâncias poliméricas extracelulares compostas por polissacarídeos, proteínas e DNA para formar uma camada de biofilme.Lave várias vezes com tampão para remover as bactérias não ligadas.Inverta a placa para garantir a remoção do líquido residual do poço e deixe o biofilme...

Fonte: Hu, Y., et al. Análise das Interações entre Endobióticos e Microbiota Intestinal Humana Utilizando Sistemas de Fermentação em Banhos In Vitro. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o uso da cromatografia de camada fina (TLC) para avaliar a degradação de exopolissacarídeos (EPS) pela microbiota fecal humana. Fragmentos de EPS em supernadantes de fermentação são separados com base em tamanho e polaridade usando TLC, e então visualizados como faixas coloridas após a coloração específica...

Fonte: Schumacher, D., e Sogaard-Andersen, L. Imagem de Células Vivas por Fluorescência do Ciclo Celular Vegetativo Completo da Bactéria Social de Crescimento Lento Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o uso de imagens de células vivas para rastrear as origens dos cromossomos marcados com fluorescência durante a divisão celular bacteriana. Ela captura a dinâmica da segregação cromossômica usando microscopia de contraste de fase em time-lapse e fluorescência.

Fonte: Tokunou, Y. et al., Detecção Eletroquímica do Efeito Cinético de Isótopos de Deutério no Transporte Extracelular de Elétrons em Shewanella oneidensis MR-1. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a montagem e operação de um modelo de reator eletroquímico projetado para simular a formação de biofilmes em superfícies de eletrodos. A estimulação eletroquímica controlada promove a adesão microbiana, levando ao desenvolvimento gradual de um biofilme bacteriano monocamada.

Fonte: Naji, A., et al. Estudo do estresse oxidativo causado pelos estreptococos do grupo Mitis em Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o uso de SKN-1 marcado com proteína fluorescente verde em C. elegans para monitorar o estresse oxidativo ao rastrear a fluorescência verde. Vermes expostos a S. gordonii apresentam forte fluorescência nuclear, confirmando estresse induzido por patógenos, enquanto aqueles alimentados com E. coli apresentam fluorescência verde difusa no...

Fonte: Nielsen, T. B., et al., Modelo de Aspiração Orofaríngea Murina de Pneumonia Bacteriana Associada a Ventiladores e Hospitalares. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento de administrar bactérias através da orofaringe até os pulmões de um camundongo anestesiado para induzir infecção pulmonar e desencadear uma resposta imune.

Fonte: Zhao, K., et al. Um modelo In Vitro para Estudar o Efeito da Terapia Fotodinâmica Mediada por Ácido 5-Aminolevulínico no Biofilme de Staphylococcus aureus . J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra um protocolo de terapia fotodinâmica para avaliar os efeitos antibacterianos em biofilmes bacterianos Gram-positivos. Os biofilmes são divididos em quatro grupos: dois recebem um precursor fotosensimizador e dois recebem um tampão. Todos são incubados no escuro, seguidos por exposição à luz...

Source: Escudero, J. A., et.al. Testing the Role of Multicopy Plasmids in the Evolution of Antibiotic Resistance. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates how escalating cefazidime exposure is used to compare the survival of three E. coli strains with different copies of the ampicillin resistance gene. It shows that only the strain with a multicopy plasmid survives at higher drug levels, highlighting how increased gene copy number accelerates resistance evolution.

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the phage-mediated transfer of donor DNA carrying an excisable antibiotic resistance cassette into Escherichia coli. The integrated cassette replaces the target gene via homologous recombination, resulting in a stable gene deletion.

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method for studying host-pathogen interactions using a micro-parallel plate flow chamber seeded with human primary endothelial cells. Following endothelial cell activation by an ionophore and perfusion with fluorescently labeled bacteria, the cells release von Willebrand factor (VWF), which binds bacterial adhesins under shear...

Source: Holt-Torres, P. S. et al. Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro. J. Vis. Exp. (2023)This video demonstrates the use of the focused-contact exposure method to evaluate the antibacterial activity of nanostructured surfaces. It outlines the steps involved in establishing direct contact between bacteria and the nanostructured surface, incubation, bacterial collection, and colony counting to assess viability.

Source: Dubois, V., et al. Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure of co-culturing amoebae with mutant bacterial strains to evaluate their intracellular survival and identify virulence markers through differences in colony counts.

Fonte: Nagre, N., et al. Macrófago alveolar, fagocitose e eliminação bacteriana em camundongos. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demonstra a avaliação da fagocitose mediada pelo receptor do complemento usando glóbulos vermelhos de ovelha opsonizados com IgM e complemento, seguida de sua absorção por macrófagos de camundongos. A extensão da fagocitose é quantificada medindo um produto cromogênico azul formado por oxidação catalisada por hemoglobina do diaminofluoreno.

Fonte: Zhang, S., et al. Rota Subaracnoidal Intracraniana de Infecção para Investigar Papéis de Streptococcus suis Biofilms em Meningite em um Modelo de Infecção de Camundongo. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra a detecção da expressão gênica alvo em um cérebro de camundongo infectado por bactérias. O RNA é extraído, tratado com uma enzima degradante do DNA e transcrito reversamente em cDNA. O cDNA é amplificado por ciclo térmico com primers específicos de cada gene, enquanto um corante...

Fonte: Radulovic, K., et al. Injeções de lipopolissacarídeo em camundongos para imitar a entrada de produtos derivados de microbianos após ruptura da barreira intestinal. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um procedimento passo a passo para injetar lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos intraperitonealmente para induzir inflamação sistêmica.

Veja culturas de células renais de porco, com uma cultura pré-tratada com um inibidor que aumenta o pH lisossômico, prejudicando a degradação autofágica-lisossômica.Adicione bactérias patogênicas e centrifuge para aumentar o contato hospedeiro-patógeno.Incubar para permitir a invasão bacteriana e internalização nas vesículas endocíticas.As bactérias internalizadas consomem nutrientes do hospedeiro para se replicar, desencadeando estresse metabólico.Esse estresse ativa a autofagia, onde uma...

Pegue uma cultura aderente de macrófagos murinos.Trate bem o teste com um buffer contendo Wnt5A, uma molécula sinalizadora, e o controle apenas com buffer.Infeccione com um patógeno bacteriano e incube.Nas células testadas, Wnt5A ativa uma cascata de sinalização que potencializa a reorganização do citoesqueleto para impulsionar a absorção bacteriana nos fagossomos, enquanto células controle que não possuem essa sinalização internalizam menos bactérias.Lave para remover bactérias não...

Fonte: In, J. G., et al. Monocamadas colonoides humanas para estudar interações entre patógenos, comensais e epitélio intestinal do hospedeiro. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demonstra o procedimento para cultivar células epiteliais derivadas do cólon em um sistema Transwell revestido de colágeno para gerar uma monocamada produtora de muco que modela a barreira intestinal e possibilita estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Fonte: Luukinen, H., et al. Modelagem da tuberculose em peixes-zebra adultos infectados por Mycobacterium marinum . J. Vis. Exp. (2018).

Fonte: Sigal, N., et al. Purificação de RNA a partir de Listeria monocytogenes Cultivada Intracelularmente em Células Macrófagos. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a extração de RNA de Listeria monocytogenes isolada de macrófagos murinos infectados. O protocolo preserva o RNA, lisa células usando fenol–clorofórmio e calor, e separa o RNA por centrifugação. Sal e etanol, combinados com incubação a frio, promovem a precipitação de RNA. O RNA resultante captura a expressão gênica induzida...

Fonte: Vonaesch, P. et. al., Análise de Imunofluorescência da Formação de Grânulos de Estresse após Desafio Bacteriano em Células de Mamíferos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a infecção das células epiteliais pela bactéria patogênica Shigella flexneri e a resposta celular do hospedeiro resultante. Proteínas efetoras bacterianas interrompem a tradução do hospedeiro, desencadeando a formação de organelos sem membrana chamados grânulos de estresse, que refletem a resposta adaptativa da...

Comece com uma cultura de células imunes infectadas por bactérias patogênicas que formam corpos de inclusão intracelular.A infecção bacteriana prejudica a via de apresentação do antígeno nas células imunes.Pegue uma cultura não infectada como controle.Em seguida, adicione um antígeno proteico modelo e incube.As células imunes internalizam, processam e apresentam os peptídeos derivados de antígenos modelo em moléculas MHC-I.Após a incubação, lave as células para remover qualquer antígeno não...

Fonte: Chetrit, D., et al. Aplicação de imagens de células vivas e tomografia crioeletrônica para resolver características espaçotemporais do sistema de secreção Dot/ICM da Legionella pneumophila . J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra a preparação e a imagem de bactérias patogênicas marcadas com fluorescência. As almofadas de agarose são primeiro preparadas e posicionadas dentro de uma moldura adesiva. Uma suspensão de bactérias geneticamente modificadas que expressam uma proteína...

Fonte: Winston, J. A., et al. Modelo de camundongo tratado com cefoperazona da cepa clinicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o procedimento para inocular camundongos pré-tratados com antibióticos com esporos de Clostridium difficile para estabelecer um modelo murino de infecção para estudar patogênese e respostas do hospedeiro.

Fonte: Winston, J. A. et al. Modelo de camundongo tratado com cefoperazona da cepa clinicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a quantificação de Clostridium difficile em amostras fecais de um modelo de camundongo infectado usando técnicas de cultivo seletivo. Ele descreve os procedimentos para coleta de amostras, processamento anaeróbico, diluição serial e enumeração de colônias para avaliar a colonização bacteriana e as interações...

Source: Berens, C. et al. Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the use of immunoblotting to assess apoptosis inhibition by the bacterial effector protein CaeB in human cells. It outlines the steps for detecting apoptotic markers following doxycycline-induced expression of pro-apoptotic proteins in host cells expressing the effector.

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Source: Li, T., et al. Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates how cigarette smoke extract weakens antimicrobial defense in lung epithelial cells by reducing AMP production, leading to increased bacterial invasion. The procedure measures intracellular bacterial load to assess the impact of smoke exposure on host-pathogen interactions.

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

Source: Barbero, A. M., et al. Fluorescence Assays for the Study of Mycobacterium tuberculosis Interaction with the Immune Receptor SLAMF1. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates the procedure for labeling host immune receptors that bind bacterial surface antigens, enabling their detection through flow cytometry.

Source: Zhang, C. et al. Development and Assessment of Intracellular Infection Models for Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates the quantification of intracellular survival of a methicillin-resistant bacterial pathogen in mouse peritoneal macrophages. It outlines the steps involved in infection, extracellular bacterial clearance, host cell lysis, and colony enumeration to assess bacterial survival within host macrophages.

Source: Gutiérrez, S., et al., Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the magnetic isolation of phagosomes containing biotin–streptavidin bead–coated bacteria from infected macrophages. The protocol includes buffer treatments, cell disruption, magnetic separation, and washing to yield purified phagosomes for analysis.

Fonte: Mills, B., et al., Triagem Óptica de Novas Sondas Específicas para Bactérias em Tecido Pulmonar Humano Ex Vivo por Endomicroscopia a Laser Confocal. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra imagens em tempo real de Staphylococcus aureus marcado fluorescentemente em suspensão e tecido pulmonar usando microscopia de fluorescência confocal fibrada.

Fonte: Ng, K. M., Tropini, C. Visualização das Interações Microbiota-Hospedeiro Intestinal via Hibridização In Situ por Fluorescência, Coloração por Lectina e Imagem. J. Vis. Exp. (2021).Este vídeo demonstra o procedimento de hibridização fluorescente in situ (FISH) para colorir a microbiota intestinal dentro do tecido intestinal do camundongo, hibridizando sondas fluorescentes com rRNA bacteriano (ácido ribonucleico ribossomal) e contracolorindo as estruturas do hospedeiro para análise...

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al., Infecção Bacteriana Oral e Eliminação em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para monitorar a eliminação bacteriana em Drosophila , transferindo uma mosca infectada por vários tubos contendo alimentos, recuperando bactérias soltadas e quantificando colônias viáveis por diluição e placagem em série.

Fonte: de Vries, C. R., et al., Um modelo de inoculação retardada da infecção crônica de feridas por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra uma técnica de imagem bioluminescente para monitorar a progressão da infecção bacteriana em um modelo de camundongos vivo. Bactérias patogênicas modificadas com o sistema repórter luxABCDE emitem luz no local da infecção, permitindo a visualização de bactérias metabolicamente ativas. Ao imagear o camundongo ao longo do tempo, os...

Fonte: Shi, J., et al. Triagem e identificação de supressores silenciadores de RNA a partir de efetores secretados de patógenos vegetais. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra um ensaio de coinfiltração para identificar proteínas efetoras de patógenos que suprimem o silenciamento de RNA na Nicotiana benthamiana 16c. Um repórter fluorescente e um gene efetor candidato são entregues às folhas da planta via Agrobacterium. Normalmente, o silenciamento de RNA degrada os transcritos repórteres,...

Fonte: Niu, L., et al. Visualização da morte celular lítica de macrófagos durante infecção por micobactérias em embriões de peixe-zebra via microscopia intravital. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o uso da microscopia confocal intravital para visualizar a morte celular lítica de macrófagos em embriões de peixe-zebra após infecção por Mycobacterium marinum .

Fonte: Seman, B. G., et.al. Modelo de imagem neonatal da sepse bacteriana Gram-negativa. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o isolamento de neutrófilos e monócitos inflamatórios de baços de camundongos neonatais e sua aplicação em um ensaio luminescente que mata bactérias. Ele cobre dissociação mecânica, lise de glóbulos vermelhos, enriquecimento celular baseado em esferas magnéticas, incubação bacteriana e proteção antibiótica. Leituras de luminescência temporizadas indicam internalização...

Fonte: Choi, Y. S., et al. Detecção in situ de bactérias em tecidos embutidos em parafina usando uma sonda de DNA marcada com digoxina direcionada ao rRNA 16S. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demonstra a detecção in situ de bactérias em seções de tecido gengival de camundongos usando sondas de DNA marcadas com digoxinas direcionadas ao DNA bacteriano. A seção é incubada com a sonda. Anticorpos conjugados com fosfatase alcalina específicos da digoxina são adicionados. Fosfatases endógenas são...

Fonte: Valentine, M. E., et al., Geração de mutantes de deleção gênica em quadro em Pseudomonas aeruginosa e Teste para Atenuação de Virulência em um Modelo Simples de Infecção em Camundongo. J. Vis. Experiência (2020)Este vídeo demonstra o uso de uma abordagem de imagem baseada em bioluminescência para monitorar infecção bacteriana em um modelo de camundongo vivo. Imagens bioluminescentes e por raios X sequenciais permitem visualização em tempo real e localização anatômica da infecção...

Fonte: Luyts, N., et al. Acompanhamento longitudinal de infecções do trato urinário e seu tratamento em camundongos usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2021).Este vídeo demonstra a indução e o rastreamento da infecção do trato urinário em um modelo camundongo usando E. coli bioluminescente injetada na bexiga, onde ocorrem adesão, invasão bacteriana e replicação intracelular. A luz emitida pelo operon bioluminescente serve como marcador em tempo real da carga bacteriana durante a...

Fonte: O'Brien, V. P., et. al., Infecção Urinária Recorrente de Escherichia coli Desencadeada pela Exposição à Bexiga Vaginalis por Gardnerella vaginalis em Camundongos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o uso da microscopia eletrônica de varredura para visualizar a colonização bacteriana e as interações hospedeiro-patógeno no epitélio urinário de um modelo de camundongo pré-infectado.

Fonte: Bernut, A., et al., Decifração e Imagem da Patogênese e Cordamento de Mycobacterium abscessus em embriões de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demonstra um protocolo para isolar e quantificar Mycobacterium abscessus de um embrião infectado de peixe-zebra. O procedimento envolve eutanásia embrionária, lise dos tecidos e homogeneização para liberar as bactérias, seguidas de centrifugação e ressuspensão em um tampão de surfactante. Por fim, a suspensão bacteriana é diluída em...

Fonte: Bernut, A., et al. Decifração e Imagem da Patogênese e Cordamento do Mycobacterium abscessus em embriões de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um protocolo que utiliza embriões transgênicos de peixe-zebra expressando macrófagos fluorescentes e infectados com a cepa áspera fluorescente Mycobacterium abscessus para visualizar as interações hospedeiro-patógeno. Ele revela como o cordão extracelular possibilita a evasão imunológica, promovendo a sobrevivência bacteriana e...

Comece com uma amostra de água contaminada que provavelmente contém coliformes fecais, incluindo E. coli.Realize uma diluição serial em água destilada para reduzir a turbidez e a carga microbiana.Misture a amostra diluída desejada com o meio nutritivo e coloque-a em um chip microfluídico.Use filtração a vácuo para capturar bactérias em uma membrana dentro do canal serpentino do chip.Adicione o meio nutritivo na câmara superior e incube para melhorar a recuperação bacteriana.Substitua o meio por...

Fonte: Makowski, Ł., et al. Imagem de Células Vivas do Ciclo de Vida do Predador Bacteriano Bdellovibrio bacteriovorus usando Microscopia de Fluorescência em Time-Lapse. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra imagens de fluorescência em time-lapse de Bdellovibrio bacteriovorus predando E. coli imobilizada sob uma almofada de agarose, permitindo visualização em tempo real da replicação intracelular e liberação de prole para estudar predação bacteriana e interações hospedeiro-patógeno.

Fonte: Tay, S. B., et.al. Perturbação Antivirulenta de Biofilmes Patogênicos usando lactonases modificadas para apagamento do quórum. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o processo de inibição da formação de biofilmes ao introduzir uma enzima que interrompe a sinalização celular bacteriana. A enzima impede que as bactérias produzam substâncias poliméricas extracelulares, reduzindo assim o desenvolvimento de biofilmes em um microprato com fundo de vidro. Por fim, a estrutura do biofilme é...

Fonte: Collins, A. J., et al., Estabelecendo Culturas Binárias Estáveis de Saccharibacterias Simbióticas a partir da Cavidade Oral. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra o uso da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detectar Saccharibacterias em uma cultura binária com Actinomyces. O protocolo descreve amplificação do DNA e eletroforese em gel para confirmar uma interação estável hospedeiro-parasita.

Fonte: Matthysse, A. G. Adesão de bactérias às superfícies das plantas medida em laboratório. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra a avaliação da ligação bacteriana às raízes das plantas usando microscopia de contraste de fase. Amostras de raízes de mudas incubadas com bactérias são primeiro montadas para verificar a presença de bactérias livres. As amostras são então lavadas para remover bactérias frouxamente fixadas e remontadas usando uma capa adequada para evitar danos. Por fim, o...

Fonte: Matthysse, A. G. Adesão de bactérias às superfícies das plantas medida em laboratório. J. Vis. Exp., (2018)Este vídeo demonstra um protocolo para medir a colonização radicular de mudas de tomate por bactérias patogênicas selvagens e deficientes em celulose. Contagens viáveis de bactérias aderentes firmes apresentam maior adesão e formação de microcolônias pela cepa selvagem, destacando o papel da celulose na colonização radicular estável.

Fonte: Brown, A. O., e Orihuela, C. J. Visualização de Streptococcus pneumoniae em Microlesões Cardíacas e Remodelação Cardíaca Subsequente. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo demonstra a imunocoloração de seções de tecido cardíaco de camundongos fixadas quimicamente para visualizar bactérias patogênicas localizadas em microlesões induzidas por infecção. O processo inclui lavagem de tecidos, permeabilização de membranas, bloqueio de sítios inespecíficos, marcação de anticorpos, contracoloração nuclear...

Fonte: Specker, J. T., et al. Investigação da cooperação microbiana por meio de análise por espectrometria de massa por imagem de colônias bacterianas cultivadas em ágar e tecido durante infecções. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o uso da espectrometria de massa de dessorção/ionização a laser assistida por matriz (MALDI) para visualizar a distribuição de aminoácidos em tecidos intestinais de camundongos infectados com Clostridioides difficile, sozinho ou em combinação com Enterococcus...

Fonte: Bucher, T., et. al., Metodologias para Estudo de Biofilmes de B. subtilis como Modelo para Caracterização de Inibidores de Biofilmes de Pequenas Moléculas. J. Vis. Exp.(2016)Este vídeo demonstra a preparação de colônias maduras de biofilme bacteriano para imagens de alta resolução. Ele cobre etapas de fixação, desidratação, montagem e revestimento metálico para preservar e visualizar a morfologia do biofilme.

Fonte: Beaudoin, T., et al. Visualizando os efeitos do escarro no desenvolvimento de biofilme usando um modelo de vidro coberto com câmara. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra um método in vitro para avaliar como a fibrose cística derivada do paciente influencia a formação de biofilmes bacterianos. Utilizando lâminas de câmara, coloração fluorescente e microscopia confocal, revela espessura aumentada, arquitetura alterada e maior biomassa viável em biofilmes cultivados com escarro,...

Pegue tubos com um meio contendo um composto de nanopartículas, engenheirado a partir de uma combinação de metais de transição e carbono.Introduza bactérias patogênicas Gram-positivas e Gram-negativas resistentes a antibióticos em tubos separados como amostras de teste.Inclua bactérias não tratadas como controle negativo e bactérias tratadas com antibióticos como controle positivo.Incube as amostras com sacudimento.Em bactérias Gram-negativas, a membrana externa porosa e a fina camada de...

Fonte: Bratton, B. P., et al., Imagem tridimensional de células bacterianas para representações celulares precisas e localização precisa de proteínas. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o método para adquirir e analisar imagens de fluorescência tridimensionais de células bacterianas para estudar a organização das proteínas no nível de célula única.

Fonte: Le, T. A. N. , et al., Medindo os Efeitos de Bactérias e Produtos Químicos na Permeabilidade Intestinal de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um ensaio baseado em fluorescência para quantificar a permeabilidade intestinal em C. elegans exposto a Pseudomonas aeruginosa. Comparados aos controles alimentados com Escherichia coli, os vermes tratados com patógenos apresentam maior vazamento de fluoróforos para a cavidade corporal, indicando danos na barreira...

Fonte: O'Brien, V.P. et al. Infecção urinária recorrente de Escherichia coli desencadeada pela exposição à bexiga de Gardnerella vaginalis em camundongos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a preparação de um inóculo de Gardnerella vaginalis para estabelecer um modelo murino de infecção urinária recorrente.

Fonte: Lenhard, A. et al. Um modelo camundongo para a transição de Streptococcus pneumoniae de colonizador para patógeno após coinfecção viral recapitula a doença agravada pela idade. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um modelo de co-infecção em camundongos no qual o vírus da gripe desencadeia a transição de Streptococcus pneumoniae de colonizador para patógeno. Ele descreve as etapas envolvidas na colonização bacteriana, infecção viral e progressão da doença.

Fonte: Lenhard, A., et al. Um modelo camundongo para a transição de Streptococcus pneumoniae de colonizador para patógeno após coinfecção viral recapitula a doença agravada pela idade. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o processamento dos pulmões de um camundongo co-infectado por uma bactéria patogênica e um vírus. A trituração, homogeneização e blindagem do tecido pulmonar permitem quantificar a carga bacteriana, indicando disseminação bacteriana para os pulmões e gravidade da doença.

Fonte: Cross, T., et al., Uma Técnica de Enriquecimento Otimizada para o Isolamento de Espécies de Bacteriófagos de Arthrobacter a partir de Isolados de Amostras de Solo. J. Vis. Exp.(2015)Este vídeo demonstra a preparação de uma cultura bacteriana para a produção de bacteriófagos. Ele cobre as etapas de inoculação de uma bactéria do solo em um frasco com defletor, promovendo crescimento uniforme por aeração e agitação, e monitorando a densidade celular usando medições ópticas de densidade.

Fonte: Conover, M. S. et al., Estabelecimento e Caracterização de ITU e CAUTI em um Modelo de Camundongo. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra a detecção de comunidades bacterianas intracelulares (IBCs) em tecido bexiga de camundongos infectados com Escherichia coli que expressa β-galactosidase. Após fixação tecidual, permeabilização e coloração com X-gal, os IBCs aparecem como pontos azuis sob um microscópio dissecante, confirmando a invasão bacteriana durante infecção urinária.

Fonte: Wang, Y., et al. In Vivo Investigação da Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecções por Queimaduras por Acinetobacter baumannii multirresistente a medicamentos usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra como estabelecer uma infecção por queimadura em um modelo de camundongo aplicando um bloco de latão aquecido seguido por um inoculo bacteriano patogênico. As bactérias colonizam a matriz extracelular exposta e formam um biofilme, possibilitando...

Fonte: Wang, Y., et al. In Vivo Investigação da Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecções por Queimaduras por Acinetobacter baumannii multirresistente a medicamentos usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o procedimento para imagem de infecções por queimaduras em camundongos inoculados com Acinetobacter baumannii que transportam um operon bioluminescente. Ele demonstra como a oxidação do substrato catalisada por luciferase produz luz proporcional à...

Fonte: Barbero, A. M., et.al. Ensaios de fluorescência para o estudo da interação entre Mycobacterium tuberculosis e o receptor imunológico SLAMF1. J. Vis. Exp. ( (2025)Este vídeo demonstra um ensaio baseado em fluorescência para estudar a interação entre um receptor de macrófagos e antígenos do Mycobacterium tuberculosis . Antígenos marcados fluorescentemente em um coverslip são incubados com extratos de proteína de macrófagos, reticulados, marcados por anticorpos e visualizados por sinais de...

Fonte: Li, J., et al. Desenvolvimento de um modelo larval de infecção por peixe-zebra para Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra o procedimento de microgavage, no qual uma larva de peixe-zebra anestesiada é imobilizada em agarose e injetada oralmente com uma bactéria patogênica usando uma agulha guiada por traçadores. O parto não invasivo imita infecção natural, permitindo a análise da replicação bacteriana, liberação de toxinas e danos epiteliais intestinais.

Fonte: Rufián, J. S., et.al. Análise de célula única da expressão dos genes de Pseudomonas syringae no tecido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um método de infiltração a vácuo para introduzir um patógeno bacteriano nas folhas das plantas de Arabidopsis . A abordagem utiliza uma suspensão bacteriana preparada e pulsos de vácuo para permitir uma entrada uniforme através dos estomas, resultando em infecção controlada nas folhas.

Fonte: Casanova, A., et al. Ensaios baseados em microscopia para triagem de alta produtividade de fatores do hospedeiro envolvidos na infecção por Brucella em células hela. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens de alta taxa da infecção por Brucella abortus em células epiteliais com knockdown STING mediado por siRNA para investigar o papel da detecção do DNA citosólico na replicação intracelular bacteriana e na resposta imune inata do hospedeiro.

Fonte: Miquel Guennoc, C., et al. Novo método para análise qualitativa multiescala de biofilmes bacterianos em colônias fúngicas filamentosas usando microscopia confocal e eletrônica. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a preparação de uma cultura fúngica em membranas de celofane tratadas para apoiar a formação de colônias e o crescimento radial. Em seguida, mostra o cultivo e preparação das células bacterianas do solo para ensaios de interação. Por fim, ilustra como as células bacterianas...

Fonte: Harris, S. L., et al. Monitoramento da colonização bacteriana e manutenção nas raízes de Arabidopsis thaliana em um sistema hidropônico flutuante. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um protocolo para monitorar a colonização de bactérias associadas às raízes em mudas de Arabidopsis thaliana cultivadas em um sistema sem solo. Após a colonização, as bactérias são deslocadas por sonicação, depois diluídas, placadas e incubadas para formar colônias que refletem a ligação e viabilidade...

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Source: Jackson, L., et al. Visualization of Pseudomonas aeruginosa within the Sputum of Cystic Fibrosis Patients. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in situ visualization of Pseudomonas aeruginosa within chemically cleared cystic fibrosis sputum using fluorescent labeling and confocal microscopy to reveal bacterial localization and biofilm structure.

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Source: Ahn, J. J., et al. Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)The video demonstrates bacterial load measurement in spleen and liver tissues isolated from mice infected with an intracellular bacterial pathogen. Bacteria, accumulated within tissue-resident phagocytes during systemic infection, are released using detergent-based lysis and mechanical disruption. Serial dilutions of the homogenates are plated on...

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al. Infecção Bacteriana Oral e Eliminação em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra a infecção oral de Drosophila melanogaster com bactérias patogênicas. Inclui a preparação de frascos de infecção e a transferência de moscas famintas para possibilitar a ingestão bacteriana. O procedimento captura a colonização intestinal, seguida pela esterilização superficial e homogeneização das moscas. Por fim, mostra a quantificação da carga bacteriana...

Fonte: Mueller, A., et al. Um modelo experimental para estudar a coinfecção tuberculose-malária na transmissão natural de Mycobacterium tuberculosis e Plasmodium berghei. J. Vis. Exp. (2014)Este vídeo demonstra a entrega em aerossol de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) a camundongos usando um sistema de câmara baseado em nebulizador para induzir infecção pulmonar, fornecendo um modelo controlado e reprodutível para estudar a transmissão aérea da tuberculose e as interações hospedeiro-patógeno in...

Fonte: de Vries, C. R., et.al. Um modelo de inoculação retardada da infecção crônica da ferida por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a inoculação tardia de Pseudomonas aeruginosa luminescente em um camundongo com duas feridas dorsais de espessura total cobertas por um curativo transparente. Isso facilita a formação de biofilmes e o estabelecimento de infecções crônicas. O monitoramento regular da bioluminescência permite quantificar a carga bacteriana e acompanhar...

Fonte: Liu, X., et al. Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a diminuição da microbiota intestinal nativa em mosquitos usando uma solução contendo sacarose com antibiótico. Isso é seguido por uma recolonização controlada com uma suspensão bacteriana administrada por meio de um sistema de alimentação por membrana para estabelecer uma população bacteriana definida no intestino do mosquito.

Fonte: Seman, B. G., et al. Um modelo de imagem neonatal para sepse bacteriana gram-negativa. J. Vis. Exp. (2020)O vídeo demonstra um modelo neonatal de camundongo para estudar infecção sistêmica usando bactérias bioluminescentes encapsuladas. Filhotes neonatais são injetados com suspensões bacterianas de alta ou baixa dose e retornados à mãe para cuidados pós-natais. As bactérias encapsuladas escapam da detecção imune precoce, se espalham sistêmicamente e são visualizadas ao longo do tempo por...

Fonte: Shi, J., et al., Triagem e Identificação de Supressores de Silenamento de RNA de Efetores Secretados de Patógenos Vegetais. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o procedimento para preparar uma cultura de Agrobacterium tumefaciens induzindo a expressão gênica de virulência com acetosiringona, seguida pela remoção do antibiótico por lavagem e ressuspensão, para gerar uma suspensão pronta para transformação e entrega de genes nos tecidos vegetais.

Fonte: Behera, R.K. et al., Um método baseado em fluorescência para estudar a regulação gênica bacteriana em tecidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a preparação de culturas hemolíticas de Staphylococcus aureus para padronizar o crescimento bacteriano e alcançar a sincronização metabólica para estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Fonte: Shi, J., et al., Triagem e Identificação de Supressores de Silenamento de RNA de Efetores Secretados de Patógenos Vegetais. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra o procedimento para preparar uma cultura de Agrobacterium tumefaciens induzindo a expressão gênica de virulência com acetosiringona, seguida pela remoção do antibiótico por lavagem e ressuspensão, para gerar uma suspensão pronta para transformação e entrega de genes nos tecidos vegetais.

Fonte: Chen, Y., et al. Avaliando a Virulência e Patogênese da Infecção por Aeromonas em um Modelo de Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um ensaio de sobrevivência usando C. elegans para modelar a patogênese da Aeromonas , onde a ingestão oral da bactéria leva a infecção intestinal e mortalidade, possibilitando uma avaliação quantitativa da virulência bacteriana em um sistema hospedeiro vivo.

Comece com camundongos imunodeficientes portadores de tumores de xenoenxerto subcutâneos derivados de células humanas de câncer colorretal.Administre por via oral Pediococcus pentosaceus, uma bactéria do ácido lático segura para consumo e modificada para secretar uma proteína anticâncer, ao camundongo tratado.Administre soro no rato de controle.Por serem tolerantes ao ácido, as bactérias sobrevivem ao ambiente ácido do estômago e chegam ao intestino.Lá, eles colonizam o lúmen intestinal e...

Comece com camundongos que apresentam tumores sólidos implantados subcutâneamente na coxa.Injete os camundongos pela veia caudal com uma cepa não virulenta, modificada de Salmonella typhimurium.As bactérias circulam na corrente sanguínea e se acumulam seletivamente no microambiente tumoral hipóxico e imunossuprimido.Eles carregam um plasmídeo que codifica um peptídeo de fusão terapêutica composto por um peptídeo penetrante em células e o domínio alvo mitocondrial de uma proteína pro-apoptótica,...

Fonte: Chen, Y., et al. Avaliando a Virulência e Patogênese da Infecção por Aeromonas em um Modelo de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra o Ensaio de Toxicidade Líquida de C. elegans com Aeromonas, um método usado para avaliar a virulência bacteriana medindo a sobrevivência de vermes em um ambiente líquido com poucos nutrientes. O ensaio revela patogenicidade específica da cepa com base na extensão do dano induzido por toxinas e na mortalidade em C. elegans.

Fonte: Nag, D., et al. Quantificação da colonização e diarreia por Vibrio cholerae no modelo adulto de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um protocolo para quantificar a carga bacteriana intestinal em peixes-zebra adultos infectados com uma cepa resistente a antibióticos de Vibrio cholerae. Após a eutanásia e dissecação, o trato intestinal é isolado, homogeneizado com contas de vidro e processado para liberar as bactérias. O homogeneado resultante é colocado em um meio...

Fonte: Nag, D., et.al. Quantificação da colonização e diarreia por Vibrio cholerae no modelo adulto de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a inoculação de peixes-zebra adultos com uma cepa patogênica de Vibrio cholerae para estudar a colonização intestinal e os desfechos da doença. Mostra como toxinas bacterianas prejudicam a integridade intestinal, levando a vazamento de líquido, secreção de muco e diarreia aquosa antes que os peixes estejam preparados para análise adicional.

Fonte: Patras, K. A., Doran, K. S. Um modelo murino de colonização vaginal do grupo B por Streptococcus . J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a preparação e inoculação vaginal de uma fêmea de camundongo tratada com hormônios e com Streptococcus do Grupo B para modelar a infecção. Explica como cultivar e preparar as bactérias, administrar o inóculo no lúmen vaginal e garantir o sucesso da infecção.

Fonte: Patras, K. A. & Doran, K. S. Um modelo murino de colonização vaginal do grupo B por Streptococcus . J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a quantificação da carga vaginal do Streptococcus do Grupo B (GBS) em um modelo de camundongo, utilizando swab e cultura cromogênica. Ele descreve as etapas envolvidas na coleta de amostras, placagem e contagem de colônias para quantificar a carga de GBS no lúmen vaginal do camundongo.

Fonte: Conover, M. S., et al., J. Estabelecimento e Caracterização de ITU e CAUTI em um modelo de camundongo. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra o procedimento para montar e implantar um cateter transuretral em uma camundonga, seguido pela inoculação bacteriana para estabelecer infecção urinária associada ao cateter e investigar interações hospedeiro-patógeno mediadas por biofilme.

Fonte: Flores, E., et al. Utilizando o protozoário Paramecium caudatum como veículo para infecções alimentares em larvas de peixe-zebra. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demonstra o método de estabelecer um modelo de infecção intestinal bacteriana transmitida por alimentos em larvas de peixe-zebra, alimentando-as com paramecia infectada com E. coli fluorescente.

Fonte: Wang, Y., et al. Investigação In Vivo da Terapia Antimicrobiana de Luz Azul para Infecções por Queimaduras por Acinetobacter baumannii multirresistentes usando imagem por bioluminescência. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o procedimento para tratar infecções por queimaduras causadas por bactérias bioluminescentes e resistentes a medicamentos em camundongos, utilizando terapia de luz azul, seguido por imagens por bioluminescência para monitorar a eficácia do tratamento.

Fonte: Ditkowski, B., et al. Um modelo in vitro de um sistema de perfusão de placas paralelas para estudar a adesão bacteriana a tecidos de enxerto. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demonstra o método de usar uma câmara de fluxo de placas paralelas para perfundir bactérias marcadas fluorescentemente sobre tecidos de enxerto vascular, permitindo uma análise controlada da adesão bacteriana e da patogênese precoce sob condições de fluxo de cisalhamento.

Fonte: Beernink, B. M. et al. Agroinoculação direta de mudas de milho por injeção com clones infecciosos do Vírus do Mosaico do Rabo-de-Raposa Recombinante e do Vírus do Mosaico da Cana-de-Açúcar. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a entrega mediada por Agrobacterium de clones virais recombinantes em mudas de milho para silenciamento gênico. Ele descreve o processo de infecção por Agrobacterium , disseminação viral sistêmica e mudanças fenotípicas impulsionadas pela interferência de RNA.

Fonte: Gupta, K., et al. Injeção intrarrenal de Escherichia coli em um modelo de rato para pielonefrite. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demonstra a injeção intrarrenal de E. coli na pelve renal de um rato anestesiado para induzir uma infecção renal localizada, modelando a pielonefrite aguda. Ele destaca etapas cirúrgicas chave e técnicas assépticas necessárias para estabelecer um modelo de infecção reprodutível in vivo para análise posterior.

Fonte: Behera, R. K., et al. Um método baseado em fluorescência para estudar a regulação gênica bacteriana em tecidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um método para preparar tecido renal de camundongos infectado, colorir DNA e detectar expressão gênica bacteriana usando repórteres fluorescentes duplos. O vermelho marca todas as bactérias, e o verde destaca células sensíveis a infecções.

Fonte: Brzozowski, R. S. et al. Microscopia de fluorescência de células vivas para investigar a localização de proteínas subcelulares e as alterações na morfologia celular em bactérias. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra microscopia de fluorescência de células vivas para visualizar mudanças morfológicas em tempo real nas bactérias. Ele descreve as etapas envolvidas na imagem, aquisição em time-lapse e deconvolução para obter imagens de alta resolução em tempo real.

Fonte: McMullen, P. D., Freitag, N. E. Avaliação da invasão bacteriana de células cardíacas em cultura e colonização cardíaca em camundongos infectados usando Listeria monocytogenes. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra a injeção de Listeria monocytogenes na veia caudal de um camundongo para estabelecer infecção sistêmica. Ele mostra a circulação bacteriana, a colonização de órgãos e a quantificação da carga bacteriana no coração por meio da homogeneização do tecido, realização de diluições...

Fonte: Zhan, Y., et al. O fotobranqueamento permite a obtenção de imagens de super-resolução do anel FtsZ no cianobactério Prochlorococcus. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra o procedimento para fotobranqueamento de pigmentos em células cianobacterianas usando luz xenônica em condições frias para melhorar a imagem de fluorescência das proteínas reguladoras do crescimento.

Fonte: Zhang, M. et al., Teste Rápido de Suscetibilidade Antimicrobiana por Imagem de Espalhamento Raman Estimulado da Incorporação de Deutério em uma única Bactéria. J. Vis. Experiência (2022)Este vídeo demonstra a aplicação da microscopia de espalhamento Raman estimulado para avaliar a suscetibilidade a antibióticos, acompanhando a atividade metabólica marcada com deutério. Ao monitorar sinais de carbono-deutério, o método permite a rápida detecção de populações bacterianas resistentes e...

Fonte: Hiroyasu, A., D et al., Extração de Hemocitos de Larvas de Drosophila melanogaster para Infecção e Análise Microbiana. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para estabelecer uma infecção bacteriana em larvas de Drosophila , colocando-as em uma gota bacteriana e furando-as com uma agulha de tungstênio. As larvas são então incubadas em uma placa de ágar sulcada e rica em nutrientes para estudar as interações hospedeiro-patógeno.

Fonte: Hiroyasu, A., et al. Extração de hemócitos de larvas de Drosophila melanogaster para infecção microbiana e análise. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra imagens confocais de alta resolução de hemocitos de Drosophila melanogaster infectados com Coxiella burnetii para visualizar a localização do patógeno em 3D, permitindo uma análise detalhada da dinâmica intracelular da infecção e das interações hospedeiro-patógeno.

Fonte: Rufián, J. S., et al. Análise de célula única da expressão dos genes de Pseudomonas syringae no tecido vegetal. J. Vis. Exp. (2022).Este vídeo demonstra um método para analisar a expressão gênica em bactérias patogênicas extraídas de plantas no nível de célula única, usando um fator de transcrição marcado fluorescente. A imagem confocal revela heterogeneidade na expressão gênica da virulência, destacando a diversidade funcional dentro de uma população bacteriana clonal.

Source: Montefusco-Pereira, C. V. et al. P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives. J. Vis. Exp.(2020)This video demonstrates a co-culture model of bronchial epithelial cells and macrophage-like cells at the air-liquid interface to study host-pathogen interactions. Pathogenic bacterial infection compromises epithelial membrane integrity, triggering macrophage-like cell activation and...

Source: Nguyen, J. Q., et. al. Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the procedure of intratracheal inoculation in an anesthetized rat, involving catheter placement, bacterial delivery into the trachea, and subsequent lung infection establishment for studying host-pathogen interactions.

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates an in vivo method for analyzing shear-dependent bacterial adhesion in a live mouse model. Following surgical preparation and catheterization, the mesenteric vasculature is exposed for real-time imaging under a fluorescence microscope. Perfusion with an ionophore and fluorescently labeled bacteria reveals how shear stress triggers...

Source: Poore, K., et al. Epithelial Cell Infection Analyses with Shigella. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates an in vitro assay to assess Shigella invasion and intracellular replication in human colonic epithelial monolayers. It highlights steps for infection, antibiotic selection, host cell lysis, and recovery of intracellular bacteria for downstream analysis.

Source: Zhang, C., et al., Development and Assessment of Intracellular Infection Models for Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2025)The video demonstrates the isolation of kidneys containing Staphylococcus aureus-infected macrophages, followed by tissue homogenization to release intracellular bacteria. It quantifies bacterial persistence within macrophages in control and antibiotic-treated groups by counting colony-forming units.

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Fonte: Morgan, E., et al. Limpeza Seletiva de Nematoides Selvagens Caenorhabditis para Enriquecer Bactérias do Microbioma Intestinal. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra um protocolo para isolar bactérias intestinais de interesse de vermes selvagens Caenorhabditis . Os vermes são primeiro privados de fome e lavados para eliminar bactérias residuais de alimentação de sua superfície e lúmen intestinal, preservando os microrganismos alvo. Após a limpeza da superfície e múltiplas etapas de...

Fonte: Petersen, C. et. al., Isolamento e Caracterização da Microbiota Natural do Nematoide Modelo Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o isolamento e o cultivo de espécies bacterianas associadas a Caenorhabditis elegans. Uma lise baseada em contas de C. elegans, seguida de cultivo seletivo, permite o isolamento de diversas cepas microbianas para análise posterior.

Fonte: Liu, X., et al. Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a dissecação do intestino médio do mosquito para isolar bactérias intestinais. O intestino médio é extraído do trato digestivo, homogeneizado para liberar as bactérias e colocado em ágar nutritivo para cultivar colônias bacterianas.

Pegue um camundongo controle com microbiota intestinal normal e um camundongo experimental com microbiota intestinal esgotada. A diminuição compromete a integridade da barreira intestinal.Isso permite que as bactérias se transloquem pelo vaso sanguíneo para o tecido hepático.Injete ambos os camundongos com o vírus da hepatite B ou plasmídeo do VHB para induzir uma infecção por VHB no tecido hepático.No camundongo controle, a célula T detecta uma célula hepática infectada pela interação de seus...

Comece com uma cultura de biossensor bacteriano suspensa em um meio.Essas bactérias modificadas produzem um fator de transcrição que, ao se ligar a um metabólito fecal específico, ativa um promotor associado a um gene repórter fluorescente.A essa cultura, adicione uma amostra de fezes humanas filtrada contendo metabólitos, como o lactato, que estão envolvidos nas interações hospedeiro-microbioma.Dilua essa mistura com um meio fresco para manter um volume de reação ideal.Incubar sem tremer para...

Comece com um modelo de rato com pontos amarrados ao redor dos molares superiores para apoiar a colonização bacteriana.Espalhe repetidamente os pontos com uma bactéria patogênica oral causadora de doença gengival usando uma solução semelhante a gel.As bactérias colonizam a gengiva ao redor dos pontos.A colonização desencadeia inflamação e danifica os tecidos.As bactérias liberam toxinas que se difundem através dos tecidos danificados e entram na corrente sanguínea.Essas toxinas circulantes...

Fonte: Yang, E., et al. Isolamento de comunidades bacterianas intracelulares individuais geradas a partir de um modelo murino de infecção urinária para análise de células únicas a jusante. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o isolamento manual de células epiteliais individuais contendo comunidades bacterianas intracelulares a partir da bexiga de camundongos infectados usando micropipetamento oral, possibilitando a análise subsequente de células únicas de populações viáveis de E. coli...

Fonte: Chen, Y. et al., Avaliando a Virulência e Patogênese da Infecção por Aeromonas em um Modelo de Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um ensaio de necrose muscular em C. elegans (Caenorhabditis elegans) usando cepas patogênicas de Aeromonas . Ao alimentar minhocas que expressam proteína fluorescente verde (GFP) em placas com sementes de Aeromonas, o ensaio modela infecção bacteriana e revela danos teciduais por meio de imagens por fluorescência. A perda...

Fonte: Hu, Y. et.al., Análise das Interações entre Endobióticos e Microbiota Intestinal Humana Usando Sistemas de Fermentação em Banhos In Vitro. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a análise da produção de ácidos graxos de cadeia curta pela microbiota intestinal humana em resposta a exopolissacarídeos. Isso destaca a separação e quantificação dos produtos de fermentação microbiana usando cromatografia gasosa. Os resultados revelam que exopolissacarídeos modulam metabólitos microbianos que...

Fonte: Lo, B. C., et al. Fibrose intestinal induzida por infecção crônica por salmonela. J. Vis. Exp. (2019)O vídeo demonstra a quantificação da carga bacteriana em um modelo murino de infecção crônica com Salmonella typhimurium resistente à estreptomicina. Após a eutanásia e dissecação estéril, tecidos cecais e esplênicos são colhidos, homogeneizados com contas de aço para liberar bactérias e diluídos em série. As diluições são placadas em ágar seletivo, e colônias visíveis são contadas para...

Fonte: Figueroa, D. et al. Produção e visualização de esferoplastos e protoplastos bacterianos para caracterizar a localização de peptídeos antimicrobianos. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra a preparação de esferoplastos a partir de bactérias gram-negativas em forma de bastonete. Bactérias são cultivadas na presença de um antibiótico para formar filamentos alongados. Esses são lavados com uma solução hipertônica e tratados com um tampão de lise para remover a parede celular externa. O...

Fonte: Sigal, N., et al. Purificação de RNA a partir de Listeria monocytogenes Cultivada Intracelularmente em Células Macrófagos. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demonstra o isolamento de bactérias patogênicas internalizadas a partir de macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) infectados. As bactérias são permitidas a se fixar nas células hospedeiras, e as bactérias não ligadas são levadas pela água. Após a internalização, um antibiótico é adicionado para eliminar bactérias não...

Fonte: Temkin, M. I. et al. Ensaios de Cocultura de Alto Rendimento para a Investigação de Interações Microbianas. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para estudar interações microbianas entre Corynebacterium propinquum e Staphylococcus em uma cocultura.

Fonte: Madenspacher, J. H. e Fessler, M. B. Um método não invasivo e tecnicamente não intensivo para indução e fenotipagem de pneumonia bacteriana experimental em camundongos. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o processo de quantificar a carga bacteriana no baço de um camundongo infectado para avaliar a gravidade da infecção. O baço homogeneizado é diluído em série e placado para determinar a carga bacteriana total. Os dados resultantes fornecem insights sobre as interações...

Faça culturas de células epiteliais da bexiga urinária humana em uma placa multipoço.Incube a cultura controle com cloaces selvagens de Enterobacter cloacae, uma bactéria patogênica com estruturas semelhantes a pilos na superfície bacteriana.A subunidade FimH do pili se liga ao receptor da célula hospedeira, ancorando as bactérias do tipo selvagem à célula hospedeira.Incubar a cultura experimental com uma cloaca mutante Enterobacter sem FimH.Sem FimH, as bactérias mutantes não aderem às células...

Considere suspensões de uma cepa resistente a antibióticos de uma bactéria patogênica.Trate uma suspensão com um composto antibiótico curto que desestabiliza a membrana e a outra com o composto curto e um composto mais longo, que intercala membranas.Incube ambas as suspensões com agitação. Esses compostos imitam a estrutura da bicamada lipídica, permitindo sua inserção espontânea nas membranas bacterianas.O composto curto abrange apenas parte da espessura da membrana, criando um desajuste...

Fonte: Brown, A. O., et al. Visualização de Streptococcus pneumoniae em Microlesões Cardíacas e Remodelação Cardíaca Subsequente. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demonstra a visualização microscópica de microlesões bacterianas no tecido cardíaco de camundongo. O coração de um camundongo infectado com Streptococcus pneumoniae é colhido, lavado e fixado antes de ser processado para obter cesarianas coronais. Essas seções são coloridas com hematoxilina e eosina e examinadas ao microscópio para...

Fonte: Pava-Ripoll, et al. Detecção de patógenos bacterianos transmitidos por alimentos em moscas individuais da sujeira. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um método baseado em PCR que amplifica o DNA bacteriano alvo de amostras de moscas enriquecidas usando comprimidos específicos para patógenos, permitindo a detecção de fluorescência em tempo real e a análise da curva de fusão para confirmar a presença de patógenos transmitidos por alimentos em insetos individuais.

Fonte: Calatayud Arroyo, M., et al. Avaliação da Viabilidade de um Consórcio Bacteriano Sintético na Interface In Vitro Intestino-Microrganismo. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demonstra um modelo intestino-microrganismo in vitro para estudar a viabilidade bacteriana. Uma cocultura de células Caco-2 e HT29-MTX é incubada com bactérias pré-tratadas sob condições digestivas simuladas. A integridade da barreira epitelial é avaliada usando resistência elétrica transepitelial, e frações do meio, muco...

Fonte: Chen, H., et al. Detecção específica e precisa do patógeno de enverdimento dos cítricos Candidatus liberibacter spp. Usando PCR convencional em amostras de tecido de folhas cítricas. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a extração de DNA genômico total de tecido foliar cítrico infectado por uma bactéria patogênica. O protocolo permite a recuperação confiável de DNA para a detecção subsequente baseada em PCR do patógeno limitado pelo floema.

Source: Pett, N., et al. T4 Bacteriophage and E. coli Interaction in the Murine Intestine: A Prototypical Model for Studying Host-Bacteriophage Dynamics In Vivo. J. Vis. Exp. (2024).This video demonstrates the in vivo interaction between T4 bacteriophage and E. coli in the murine intestine, and the fecal spot plating method to quantify their coexistence by measuring bacterial colonies and phage plaques.

Source: Alshehri, M. et. al., Organotypic Tissue Model Systems for Investigating Host-Pathogen Interactions In Vitro. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates a co-culture model using multi-species oral biofilms and human oral epithelium. It highlights epithelial immune activation and enables the downstream analysis of host-pathogen interaction.