Injeção intraperitoneal de lipopolissacarídeo bacteriano em camundongos para estudar respostas imunes sistêmicas

Resumo

Fonte: Radulovic, K., et al. Injeções de lipopolissacarídeo em camundongos para imitar a entrada de produtos derivados de microbianos após ruptura da barreira intestinal. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra um procedimento passo a passo para injetar lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos intraperitonealmente para induzir inflamação sistêmica.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Injeção intraperitoneal de lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos
   1. Aspire a solução de trabalho LPS em uma seringa de 0,5 mL com uma agulha de 30 G em fluxo de ar laminar.
   2. Pese fêmeas C57Bl/6 camundongos (de seis a dez semanas de idade) e calcule a quantidade de LPS que será injetada: 10 μL (2 μg)/g de peso corporal.
      NOTA: Por exemplo, se um camundongo pesa 20 g, então é necessário injetar 20 g x 10 μL = 200 μL de solução de trabalho LPS.
   3. Manuseie o rato com delicadeza, mas firmeza, e prenda o animal com uma mão. Certifique-se de que o animal consiga respirar normalmente, mas sem se torcer durante a contenção.
   4. Incline levemente o nariz do rato para o chão para expor o abdômen para injeção. Localize a linha média do abdômen e o local da injeção na parte inferior do abdômen, à esquerda ou direita a partir da linha média. Injetar soro tampão fosfatado intraperitonealmente (i.p.) em vez de LPS em camundongos controle.
   5. Com a mão livre, injete o volume apropriado (o volume calculado no passo 1.2) da solução de trabalho LPS. Certifique-se de que a agulha tenha entrado na cavidade peritoneal, caso contrário, podem ocorrer injeções incorretas na camada muscular abdominal. Ainda assim, não penetre muito fundo com a agulha na cavidade peritoneal para evitar lesões nos órgãos internos localizados nessa área.
   6. Devolva o animal cuidadosamente à gaiola, com até 5 camundongos por gaiola.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, San Diego, CA, EUA.	tlrl-eblps
Omnican 50 Seringa de insulina descartável	B. Braun Melsungen, Melsungen, Alemanha	9151125