Preparação de Tecido da Bexiga de Camundongo para Visualização de Infecção Bacteriana

Abstract

Fonte: O'Brien, V. P., et. al., Infecção Urinária Recorrente de Escherichia coli Desencadeada pela Exposição à Bexiga Vaginalis por Gardnerella vaginalis em Camundongos. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra o uso da microscopia eletrônica de varredura para visualizar a colonização bacteriana e as interações hospedeiro-patógeno no epitélio urinário de um modelo de camundongo pré-infectado.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê local de cuidados com animais institucionais e pelo conselho veterinário JoVE.

1. Imagem de bexigas por microscopia eletrônica de varredura

   NOTA: Esse procedimento pode ser realizado a qualquer momento em que se desejasse visualizar o urotélio. Como indicado na Figura 1 (caixas roxas), as interações uropatogênicas entre E. coli (UPEC) e uroteliais são melhor visualizadas entre 6 h e 24 h após a inoculação UPEC durante a fase de formação do reservatório, e a esfoliação urotelial desencadeada por Gardnerella vaginalis é melhor visual....

Results

Figura 1. Esquema do modelo do camundongo. A linha do tempo é destacada para refletir as fases ou procedimentos do modelo delineados no protocolo. Fase 1 (laranja): Estabelecimento de reservatórios intracelulares uropatogênicos de E. col.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
30G x 1/2 agulhas	BD	305106	Para cateteres
Hemostat de pinça reta de 5 1/2"	McKesson	487377	Fixação in situ da bexiga
Revestimento sputter ACE 600	Leica		Processamento de amostras com SEM
Stub de SEM de alumínio	Ted Pella	16111	Processamento de amostras com SEM
Cloreto de cálcio	EMS	12340	Fixação in situ da bexiga
Aba adesiva de carbono condutor	Ted Pella	16084-1	Processamento de amostras com SEM
Tinta prateada condutora	Ted Pella	16034	Processamento de amostras com SEM
Secador Crítico CPD 300	Leica		Processamento de amostras com SEM
Clipe metálico de citofunil	Simport	M964B	Urina citospun
Etanol	EMS	15050	Processamento de amostras com SEM
Glicose	Sigma	G7528	Para o meio de crescimento de G. vaginalis da NYCIII
Glutaraldeído	EMS	16320	Fixação in situ da bexiga
Kit de coloração Hema 3	Fisher	23123869	Urina citospun
HEPES	Cellgro	25-060-CL	Para o meio de crescimento de G. vaginalis da NYCIII
Irídio	Ted Pella	91120	Processamento de amostras com SEM
Merlin FE-SEM	Zeiss		Microscópio eletrônico de varredura
Purificador de Água Milli-Q	Millipore	IQ-7000	Processamento de amostras com SEM
Tetróxido de ósmio	EMS	19170	Processamento de amostras com SEM
Paraformaldeído	EMS	15710	Fixação in situ da bexiga
Tubo de polietileno	Intramédico	427401	para cateteres
Proteose Peptone #3	Fisher	DF-122-17-4	Para o meio de crescimento de G. vaginalis da NYCIII
Lâmina de barbear de lâmina dupla revestida em PTFE	EMS	72000	Cortando bexigas para MEV