Preparando uma Cultura Hemolítica de Staphylococcus aureus para Estudos de Interação Hospedeiro-Patógeno

Resumo

Fonte: Behera, R.K. et al., Um método baseado em fluorescência para estudar a regulação gênica bacteriana em tecidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demonstra a preparação de culturas hemolíticas de Staphylococcus aureus para padronizar o crescimento bacteriano e alcançar a sincronização metabólica para estudos de interação hospedeiro-patógeno.

Protocolo

1. Preparação do inóculo bacteriano
   1. Estiragem de Staphylococcus aureus cepas de interesse para isolamento em placas de ágar sanguíneo a partir de um estoque de glicerol congelado. Incubar a 37 °C por 16–24 horas para confirmar fenótipos hemolíticos com base na capacidade deles de lisar glóbulos vermelhos (glóbulos vermelhos) e formar zonas transparentes e claras.
   2. Inicie as culturas durante a noite inoculando colônias individuais de cada cepa em 4 mL de caldo de soja tríptico (TSB) em tubos de vidro estéreis. Gire os tubos a 37 °C por 16–24 horas em um rolo tubular ajustado aproximadamente em um ângulo de 70° e 70 rotações por minuto (RPM).
   3. Use um espectrofotômetro para medir a densidade óptica a 600 nm (OD₆₀₀) das culturas do passo 2.1.2. Use um meio estéril como referência óptica (em branco). Dilua essas células até um OD₆₀₀ de 0,05 em 25 mL de Caldo de Soja Típtico (TSB) estéril em frascos DeLong separados de 125 mL (relação 5:1 frasco/volume) e incube as culturas em banho-maria (para transferência adequada de calor para as culturas), agitando a 280 RPM e ajustando para 37 °C.
      NOTA: O crescimento do inóculo pode ser realizado de várias maneiras; Um método para crescer células até uma fase exponencial é apresentado. De qualquer forma, é importante usar consistentemente o mesmo método para preparar as células para a inoculação.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
5% Sangue de ovelha	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Banho-maria de tremor orbital	New Brunswick Innova	NA
Caldo de Soja Triptico	VWR	90000-376
Espectrofotômetro UV-visível	Beckman Coulter-DU350	NA